UltraSensitive TM SP超敏试剂盒
Data sheet:40398a
适用于一抗：产品编号:
Mouse Kit-9701/9702/9703
Rabbit Kit-9706/9707/9708
Mouse/Rabbit Kit-9710/9720/9730
Goat Kit-9709
前言
链霉菌抗生物素蛋白(SA)是从链霉菌中分离出的蛋白质，分子量为60 KD，穿透组织的能
力比ABC, PAP复合物大，反应速度快。它含有四个亚基，每个亚基都具有与生物素(Biotin)
联接的部位，且二者间有极强的亲和力，SA的等电点接近于6.5，近中性，而卵白素(Avidin)
为10。因此，SA几乎不与组织中的内源性凝集样物质发生非特异性结合，使用链霉菌抗生
物素蛋白-过氧化酶放大系统，即可产生低背景、高放大效果，经过多年来的实验应用，证明
SP放大系统比传统的PAP、ABC方法更为简便、敏感、特异。
免疫组化染超敏试剂盒是根据链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(Streptavidin-Peroxidase, SP)连接系统设计的用于检测组织和细胞中抗原的高度敏感的试剂盒。由于采用了改良的酶
标技术和亲和纯化技术，使得该试剂盒的染方法作为免疫学和免疫病理诊断的一种可靠检
测工具，其敏感度更高、背景更清晰，特别适合于检测福尔马林固定石蜡包埋组织中低含量
的抗原。
应用范围
适用于免疫组织化学方法以显示抗原的分布，本试剂盒适用于常规福尔马林固定石蜡包
埋切片、冰冻切片、培养固定的细胞涂片，以及新鲜制备的血涂片等。
试剂盒组成
A: 内源性过氧化酶阻断剂(无) (Endogenous peroxidase blocking solution)
B: 正常非免疫动物血清(蓝) (Normal nonimmunone serum)
C: 生物素标记的第二抗体(黄) (Biotin-conjugated second antibody)
D: 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(红) (Streptavidin-Peroxidase)
注：试剂盒不含酶底物显剂及复染剂，需另行购买。
试剂盒规格及贮存条件
规格：6ml(120片)/18ml(360片)/105ml(2100片)sp文
贮存条件：本试剂盒宜4℃保存，稳定期1年
免疫组化染步骤
UltraSensitive TM S-P免疫组化染试剂盒采用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的过氧化物酶及底物素混合液来测定细胞和组织中的抗原。免疫组化染操作步骤如下：
1.石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS(0.01M，pH7.5±0.1)冲洗三次，每次3分钟。
2.根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复。
3.每张切片加1滴或50µl过氧化酶阻断溶液(试剂A)，室温下孵育10分钟，以阻断内源性
过氧化物酶的活性。PBS冲洗三次，每次3分钟。
4.除去PBS液，每张切片加1滴或50µl正常非免疫动物血清(试剂B)，室温下孵育10分钟。
5.除去血清，每张切片加1滴或50µl的第一抗体(用户自选)，室温下孵育60分钟或4℃过
夜，建议参见每种抗体的说明书。
6.PBS冲洗三次，每次3-5分钟。除去PBS液，每张切片加1滴或50µl生物素标记的第二抗
体(试剂C)，室温下孵育10分钟。PBS冲洗三次，每次3分钟。
7.除去PBS液，每张切片加1滴或50µl链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液(试剂D)，室温下
孵育10分钟。PBS冲洗三次，每次3分钟。
8.除去PBS液，每张切片加2滴或100µl新鲜配制的DAB或AEC溶液，显微镜下观察3-10
分钟。
9.自来水冲洗，苏木素复染，PBS或自来水冲洗返蓝。
10.如果用DAB显，则切片经过梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固；如果
用AEC显，则切片不能经酒精脱水，而直接用水性封片剂封片。
可能出现的问题及解决办法
1.试剂C、D孵育温度过高或孵育时间过长，可能导致染过强及非特异性背景染。
℃下孵育10分钟。
建议室温(18-30)
2.脱蜡不彻底，容易出现非特异性背景染，建议免疫组化切片脱蜡与常规H.E.脱蜡分
开。
3.操作过程中冲洗不充分，容易出现非特异性背景染，需严格控制冲洗时间与次数。
4.为防止可能出现的假阳性、假阴性结果，建议在实验过程设置阳性与阴性对照。
5.操作中滴加试剂时缓冲液PBS未沥干致使试剂稀释，将引起染强度变弱或假阴性发
生。因此，每步滴加试剂前应除去多余的缓冲液。
注意事项
1.本试剂盒仅适合人体组织免疫组化染研究使用，其它种属组织请另行咨询。
2.若将本公司的抗体、检测试剂盒与其他公司的试剂混合使用，在染过程中可能出现
异常情况，因此我们将不会对此产生的后果负责。
3.在超过有效期的试剂盒中一种或多种试剂的活性可能降低，因此不得使用过期的试剂
盒，不同批号间试剂盒也不能交叉混用。
参考文献
1.Elias, J.M. et. al. AM J Clin Pathol. 1989.92:62-67.
2.张素娟，介绍一种新的免疫组化SP方法，第三次广东省病理技术学术会议.1993:41.
3.任占平，应用SP免疫组化染法的体会，诊断病理学杂志. 199
4.1(3):176.
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