各种培养基配置
培养基
  培养基(Medium)是供微生物植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素
  按所用原料不同,可分为两类:应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的,称为天然培养基;应用化学药品配成并标明成分的,称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基,大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保管,现在均改制成粉末。培养基由于配制的原料不同,使用要求不同,而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后,易被细菌污染或分解变质,因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基),较长时间的贮存,必须放在2~6C的冰箱内。
  常见培养基有:
  1、细菌培养基
  配方一 牛肉膏琼脂培养基
  牛肉膏0.3 ,蛋白胨1.0克,氯化钠 0.5克,琼脂 1.5克,
  水 100毫升
  在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.27.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。
  配方二 马铃薯培养基
  取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液p
H值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。
  配方三 根瘤菌培养基
  葡萄糖 10 磷酸氢二钾 0.5
  碳酸钙 3 硫酸镁 0.2
  酵母粉 0.4 琼脂 20
  水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升
  先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。
  2、放线菌培养基
  配方一 淀粉琼脂培养基(高氏培养基
  可溶性淀粉 2 硝酸钾 0.1
  磷酸氢二钾 0.05 氯化钠 0.05
  硫酸镁 0.05 硫酸亚铁 0.001
  琼脂 2 100毫升
  先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。调整pH值到7.27.4,分装后灭菌,备用。
  配方二 面粉琼脂培养基
  面粉 60 琼脂 20
  水 1000毫升
  把面粉用水调成糊状,加水到500毫升,放在文火上煮30分钟。另取500毫升水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分,调整pH值到7.4,分装,灭菌,备用。
  3、真菌培养基
  配方一 萨市(Sabouraud’s)培养基
  蛋白胨 10 琼脂 20
  麦芽糖 40 1000毫升
  先把蛋白胨、琼脂加水后,加热,不断搅拌,待琼脂溶解后,加入40克麦芽糖(或葡萄糖),搅拌,使它溶解,然后分装,灭菌,备用。
  本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。
  配方二 马铃薯糖琼脂培养基
  把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分。在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。
  把这培养基的pH值调到7.27.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。
  配方三 黄豆芽汁培养基
  黄豆芽 100 琼脂 15
  葡萄糖 20 1000毫升
  洗净黄豆芽,加水煮沸30分钟。用纱布过滤,滤液中加入琼脂,加热溶解后放入糖,搅拌使它溶解,补足水分到1000毫升,分装,灭菌,备用。
  把这培养基的pH值调到7.27.4,可用来培养细菌和放线菌。
  配方四 豌豆琼脂培养基
  豌豆 80 琼脂 5
  水 200毫升
  取80粒干豌豆加水,煮沸1小时,用纱布过滤后,在滤液中加入琼脂,煮沸到溶解,分装,灭菌,备用。
  4、食用菌菌种培养基
  配方一 马铃薯蔗糖--琼脂培养基
  20%马铃薯煮汁 1000毫升
  蔗糖 20 琼脂 18
  把马铃薯洗净去皮后,切成小块。称取马铃薯小块200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后,过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升,即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,补足水分,分装,灭菌,备用。使用该培养基对pH值要求不严格,可以不测定。
  配方二 综合马铃薯培养基
  20%马铃薯煮汁 1000 毫升
  磷酸二氢钾 3 硫酸镁 1.5
  葡萄糖 20 维生素 10毫克
  琼脂 18
  先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6。分装,灭菌,备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。
  5.烟草的培养基
  在植物组织培养时,通过调节IAACTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽
  CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化
  愈伤组织诱导培养基制备
  以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ,维生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培养基后,再加入0.5mg·L-1BA8mL,0.5mg·L-1NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,0.5mol·L-1NaOH0.5 mol·L-1HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,
然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中.
  烟草叶片愈伤组织诱导
  取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解
  剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种
  5小片,一共接种6.接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1,然后在同
  样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3).
  察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率.
  器官分化及植株再生培养
  将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22 C条件下培养3,统计愈伤组织再生植株情况.
  愈伤组织诱导的总体情况
  烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而
  未形成愈伤的情况.具体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发
  生污染,但诱导率几乎各不相同.其中, 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为
  60.0℅, 在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过程中,外植
  体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整
  个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小.
  培养基还有:1640培养基
  特殊培养基:
  一 选择性培养基
  1酵母菌富集培养基
  葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化铵0.1% 磷酸二氢钾0.25% 磷酸氢二钠0.05% 七水合硫酸镁0.1% 七水合硫酸铁0.01% 酵母膏0.05%
  孟加拉红0.003% pH4.5
  2 Ashby无氮培养基 富集好养自生固氮菌
  甘露醇1% 磷酸二氢钾0.02% 七水合硫酸镁0.02% 氯化钠0.02%
  二水合硫酸钙0.01% 碳酸钙0.5%
  鉴别培养基
  EMB培养基,常用于鉴别E.coli
  蛋白胨 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氢二钾2g 伊红Y 0.4g 美蓝0.065g
  蒸馏水1000g pH7.2
  分离海洋微生物的培养基配方
  2216E培养基配方(固体培养基)
  蛋白胨 5
  酵母膏 1
  磷酸高铁 0.01
  琼脂 15-----20
  陈海水 1000毫升
  煮沸氢氧化纳(5%)的溶液调PH7.6—7.8
  其他培养基:
  1.高氏一号培养基
  KNO3:1g,
  NaCl:0.5g,
  K2HPO4:0.5g
  MgSO4·7H2O0.5g
  FeSO4·7H2O0.01g
  可溶性淀粉20g
  琼脂20g
  蒸馏水1000ml
  pH调至7.2~7.4121°C灭菌30min
  制法:先用少量水将淀粉调成糊状,再取700ml水在电炉上加热煮沸
  然后边搅拌便将淀粉糊倒入,同时保持沸腾。然后再将其他成分加入,
  溶解后补足水分至1000ml
  肉汤蛋白胨斜面:
  蛋白胨10g
  牛肉膏5g
  蒸馏水1000ml
  NaCl黑暗组织5g
  pH7.0~7.2121灭菌20min
  如配制固体培养基需加琼脂1.5%~2%,半固体培养基可加琼脂0.5%~0.8%
  不同的细胞培养基
  天然细胞培养基
  天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基,如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立早期,体外培养细胞都是利用天然培养基。但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大,因此逐渐为合成培养基所替代。目前广泛使用的天
然培养基是血清,另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。
  血清种类
  目前用于组织培养的血清主要是牛血清,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。选择用牛血清培养细胞的原因:来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。牛血清对绝大多数哺乳动物细胞都是适合的,但并不排除在培养某种细胞时使用其他动物血清更合适。

版权声明:本站内容均来自互联网,仅供演示用,请勿用于商业和其他非法用途。如果侵犯了您的权益请与我们联系QQ:729038198,我们将在24小时内删除。