实验-愈伤组织的分裂与分化
愈伤组织的分裂与分化
实验目的：1、探索植物细胞的全能性
2、了解愈伤组织细胞分化的各时期的特点
3、愈伤组织培养在植物栽培的意义
实验仪器：超净台、酒精灯、镊子、小刀、烧杯
实验药品：MS培养基、
实验取材：烟草生长部1cm左右，外植体保留一片苗叶（位于侧枝，新叶处）
实验步骤：1、MS培养基的配置
（1） 配置大量元素A液和B液
（2） 配置微量元素
（3） 配置铁盐溶液
（4） 配置有机溶液
（5） 取大量元素100g/ml，微量元素10g/ml，铁盐溶液10g/ml，有机溶液10g/ml，KT（0.5mg/ml）0.4ml，IBA(0.5mg/ml)0.8ml，脯氨酸500mg，谷氨酰胺500mg，水解络蛋白300mg，蔗糖3%，琼脂0.8%，调节PH=5.8
2、MS培养基的消毒
放于高压蒸汽锅中，灭菌1.5h之后，每瓶摇匀之后，放于24℃的恒温培养室。静置2d之后，观察培养基上有无杂菌的生成。如无，继续实验，如有，则重做培养基
3、外植体的选择
黑暗组织 烟草生长部1cm左右，外植体保留一片苗叶（位于侧枝，新叶处）
          4、外植体的消毒
（1）用洗涤剂清洗外植体，再蒸馏水洗涤之后，擦干
（2）在超净台上，用 75%的酒精溶液洗涤之后，再擦干，之后在2%的次氯酸钠中浸泡5s，蒸馏水冲洗10次，用无菌滤纸吸干。之后用小刀切取生理形状较好的叶片于灭菌的MS培养基中（一瓶放置1-2个）
          5、观察有无被污染
在24℃的恒温培养室中暗处理2d之后，观察有无杂菌生成。
          6、对照观察
将生理状况相似的愈伤组织分成2组。一组光照，一组黑暗。保证环境的其他的物理性质相同，处理1周之后，观察2组培养物的再分化情况。
          7、得出结论

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