生物安全实验室洁净等级划分
生物安全实验室洁净等级划分
洁净室（区）的检测
本文阐述了洁净室（区）的检测。对洁净室（区）级别参数尘粒最大同意数、微生物最大允数、换气次数、照度、压差、温度与相对湿度进行了实际检测方面的归纳与总结。
兽药GMP是指兽药生产质量管理规范，是兽药生产、质量管理的制度与基本准则。兽药GMP关于洁净室（区）的空调净化系统等硬件要求非常严格，洁净级别划分的规定亦十分明确。洁净室（区）的洁净级别要紧用尘粒最大同意数、微生物最大同意数与换气次数3个参数来划分，同时参照度、压差、温度与相对湿度等参数也作出了具体的指导与规定。这些参数能对洁净室（区）的级别作出相应合理的、科学的验证与监测。下面要紧阐述这些参数具体的检测。
一、 洁净室（区）尘粒
尘粒是指通常尺寸为0.001μm～1000μm的固态与液态物质或者两者的混合物。尘粒检测要紧使用仪器光散射法，即空气中的悬浮粒子在光的照射下产生光散射现象，散射光的强度与粒子的表面积成正比。检测时，先确认空调净化系统是否处于正常运行状态，换气次数或者风速、
压差能否达到要求。然后按人流与物流的规定进入洁净室（区）进行动态或者静态检测，并测量洁净室（区）的面积与容积，确定采样点的数目、位置与采样量。检测要点见表1。
参数指标
悬浮粒子
检测根据
JGJ71－90[1]、GB/T 16292-1996[2]
检测条件
1.风速或者换气次数与静压差达到级别要求，温、湿度须达到规定的要求。
2.对单向流，测试应在净化空调系统正常运行时间≥10min后开始。
3.对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行时间≥30 min后开始。
采 样 点
位    置
1．采样点通常在离地面0.8m高度的水平面上均匀布置。
2．采样点多于5点时，也能够在离地面0.8m～１.5m高度的区域内分层布置，但每层很多于5点。
最少采样点数目与次    数   
1．对任何洁净室（区），采样点的数目≥2个，总采样次数≥5次。每个采样点的采样次数能够＞1次，且不一致采样点的采样次数能够不一致。
2．最少采样点数目可查表2。
采 样 量
最小采样量见表3。
结果报告
以检测区域的某个采样点的最大平均粒子浓度与全部采样点粒子浓度平均值的95%置信上限进行报告。
表2：            洁净室（区）尘粒检测的最少采样点数
面  积m2
洁 净 度 级 别
100
10 000
100000或者300000
<10
2～3
2
2
≥10～<20
4
2
2
≥20～<40
8
2
2
≥40～<100
16
4
2
≥100～<200
40
10
3
≥200～<400
80
20
6
级别划分
≥400～<1000
160
40
13
≥1 000～<2 000
400
100
32
2 000
800
200
63
表3              洁净室（区）尘粒检测的最小采样量
洁净度级别
采样量，L/次
≥0.5μm
≥5μm
100
5.66
—
10 000
2.83
8.5
100 000或者300 000
2.83
8.5
二、  洁净室（区）微生物
洁净室（区）微生物可检测沉降菌或者浮游菌。沉降菌检测是通过自然沉降原理，收集空气中的生物粒子于培养基平皿中，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。浮游菌的检测是使用计数浓度法，即通过收集悬浮在空气中生物粒子于专门的培养基，经若干时间，在适宜的生长条件下其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境
内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室（区）的洁净度。实际检测浮游菌与沉降菌时，先确认洁净室（区）的检测条件能否达到级别要求。达到要求后，测试人员与检测仪器等按洁净室（区）的进出规定（如穿戴符合环境级别的工作服、紫外照射、仪器外体消毒等）进出洁净室（区），测试人员先测量测试区域的面积与体积，确定采样次数与采样点。浮游菌确定采样量后按仪器操作规程操作，把空气中悬浮的微生物采集到肉汤琼脂培养基上。沉降菌确定采样时间后直接把培养基裸露在空气中，让空气中的微生物自动降落在肉汤琼脂培养基上。采样要点见表4～7。采集完的培养基需在30℃～35℃培养箱中培养，时间≥48h。同时选定很多于3只培养基作空白参照培养。
微生物检测时需注意：1.检测前应认真检查每个培养皿的质量，不能使用有变质、破旧或者污染的培养基与培养皿。2.采取一切措施防止采样管的污染与其他人为对样本的污染。3.对培养基、培养条件及其他参数作全面的记录。4.由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时通常用透射光于培养皿背面或者正面认真观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或者培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。5.若在本实验室以外的环境中进行检测，则培养基在整个运输过程中务必对温度进行操纵，培养基需放在含有冰块的、消毒过的运输箱内，温度操纵在0℃～4℃，并在记录中记录运输温度。
表4              洁净室（区）浮游菌的检测要点
参数指标
浮游菌
检测根据
JGJ71－90、GB/T16293-1996[3]
检测条件
1. 风速或者换气次数与静压差达到级别要求，温、湿度须达到规定的要求。
2. 浮游菌测试前，被测试洁净室（区）已通过消毒。
3．对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行≥10min后开始。
4．对非单向流，如10 000级，100 000级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行≥30 min后开始。
采 样 点
位    置     
1．测点位置离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
2．送风口测点位置离开送风面30cm左右。
3．可在关键设备或者关键工作活动范围处增加测点。
采样点数目与次数
浮游菌测试的最少采样点数目分为日常监测及环境验证两种情况，见表5。每个采样点通常采样一次。
1）对每个100级洁净操作区域（如层流罩、层流工作台），可在离药物敞开口处30cm处设测点，每班一次。
2）对每个10 000级洁净工作区域（如药物开口工作区），可在工作面处设测点，每班一次。
采 样 量
采样量根据日常监测及环境验证确定，每次最小采样量见表6。
结果报告
以检测区域的浮游菌最大菌落浓度（个/m3）进行报告。
表5             洁净室（区）浮游菌检测的采样点数目
面    积
m2
洁  净  度  级  别
100
10 000
100  000或者300 000
验证
监测
验证
监测
验证
监测
<10
2～3
1
2
1
2
—
≥10～<20
4
2
2
1
2
—
≥20～<40
8
3
2
1
2
—
≥40～<100
16
4
4
1
2
—
≥100～<200
40
—
10
—
3
—
≥200～<400
80
—
20
—
6
—
400
160
—
40
—
13
—
注：1）表1中的面积，关于100级的单向流洁净室（包含层流工作台），指的是送风口表面积，关于10 000级，100 000级，300 000级的非单向流洁净室，指的是房间面积。
2）日常监测的采样点数目由生产工艺的关键操作点来确定。
表6           洁净室（区）浮游菌检测的最小采样量

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