(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书 | ||
(10)申请公布号 CN 102659933 A (43)申请公布日 2012.09.12 | ||
(21)申请号 CN201210119831.1
(22)申请日 2012.04.21
(71)申请人 中国农业科学院植物保护研究所
地址 100193 北京市海淀区圆明园西路2号
(72)发明人 张杰 张彦蕊 束长龙 耿丽丽 宋福平 彭琦
(74)专利代理机构 北京兆君联合知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人 胡敬红
(51)Int.CI
权利要求说明书 说明书 幅图 |
(54)发明名称
苏云金芽胞杆菌基因cry8like、与cry8G组合及其应用 | |
(57)摘要
本发明涉及苏云金芽胞杆菌基因cry8like2、与cry8G组合及其应用，属于生物防治技术领域。本发明从HBF-18中分离得到cry 8lik1e基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示，与cry 8E连接后得到cry8like2合成基因，其核苷酸序列如EQ ID NO2所示。该基因对鞘翅目害虫高毒力，特别是对蛴螬有高毒力。同时本发明提供一种蛋白组合，Cry8like2与Cry8G在鞘翅目害虫上有协同作用，对主要地下害虫蛴螬的生物防治以及我国农业绿可持续发展都有极其重要的意义，进一步为开发抗蛴螬的Bt工程菌株、转基因作物提供基因来源。 | |
法律状态
法律状态公告日 | 法律状态信息 | 法律状态 |
| 暗黑3 攻略 |
权 利 要 求 说 明 书
1.Cry 8like1蛋白，其具有SEQ ID NO3所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述蛋白，为Cry8like2蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO4所示的。
3.编码权利要求1所述的Cry 8like1蛋白的基因，其具有如SEQ ID NO1所示核苷酸序列。
4.编码权利要求2所述的Cry8like2蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO2所示。
5.一种载体，含有权利要求3或4所述的基因。
6.根据权利要求5所述载体，为pSTK 8like2，其结构如图13中所示。
7.一种蛋白组合物，由Cry8like2蛋白和Cry8Ga1蛋白组成。
8.权利要求2所述蛋白或权利要求7所述的蛋白组合物在抗鞘翅目害虫中的应用。
9.根据权利要求8所述应用，是将蛋白或蛋白组合物制成杀虫剂用于杀灭鞘翅目害虫。
10.根据权利要求8所述应用所述应用，是将编码蛋白的基因转入植物或微生物中，使其表达抗鞘翅 目害虫的特性。
11.根据权利要求8-10任一所述应用，所述鞘翅目害虫为蛴螬。
说 明 书
<p>技术领域
本发明涉及生物技术防治领域，特别是涉及一种新的苏云金芽胞杆菌基因cry8like与cry8G组合、及应用。
背景技术
蛴螬是金龟总科(Scarabaeoidea)幼虫的总称，属于鞘翅目，鳃金龟科，是地下害虫中种类最多，也是危害最大，造成植物损失最大的种类。金龟子总科种类繁多，世界上记载的有3万多种，目前我国已记录1800多种，这类害虫食性杂、分布广、生活隐蔽、适应性强、生活史长短不一，其中为害农林牧草的有100多种，防治十分困难。最主要的有暗黑鳃金龟(Holotrichia parallela)、华北大黑鳃金龟(Holotrichia obeita)和铜绿丽金龟(Anomala carpulenta)等(徐建国，范惠，张明考，杨恩华，and郭琳.(2002)暗黑鳃金龟生活习性观察及防治技术研究，植保技术与推广，9-10；李恩才，陈金焕.(1998)农田蛴螬种分布及防治技术，陕西农业科学，48-49；姜常松，姜福军，and包信平.(2008)花生蛴螬播种期一次用药全生育期控制技术，现代农业科技，121-123)。蛴螬生活习性复杂多样，危害虫态也各异，有的以成虫危害，有的以幼虫危害(胡琼波，2004)。蛴螬成虫喜食作物，林果木(杨，榆，柳，苹果，梨等)叶片、嫩茎和花蕾，果穗等，造成危害。蛴螬幼虫危害更为严重，幼虫栖居地下，取食萌发的种子咬断幼苗的根茎，蛀食根块茎等，造成轻则缺苗断垄，重则毁种绝收。幼虫不仅危害范围广，而且为害时间长，从春季到秋季，从播种到收获都有较大危害。蛴螬啃食地下块根、块茎，使作物生长衰弱，直接影响产量和品质，如花生、红
薯、马铃薯、萝卜类春秋受害严重。蛴螬啃食后不仅影响产品的外观品质，还易招致病菌从伤口入侵，对冬菜贮藏带来很大不便。近年来随着城市发展，草皮绿化面积逐年加大，对绿化植被的维护已经成为城市发展中的一项重要工作。蛴螬幼虫咬食草皮根茎，以及进一步引起的病害入侵成为城市绿化草皮的主要危害之一(谢木发.(1999)草坪地下害虫蛴螬及防治，广东园林，46-47.)。此外，蛴螬还是危害猪的寄生虫病(猪巨吻棘头虫)中间宿主和传播媒介，棘头虫寄生于猪的小肠，粪肥施于田间，蛴螬是其中间寄主。因此，蛴螬是危害农业、林业、城市绿化的重要害虫。
蛴螬是国内外公认的难以防治的地下害虫，作物地下部分损失的86％是由蛴螬造成的，据统计常年全国蛴螬发生面积约700万公顷，一般减产20％～30％。严重年份全国蛴螬发生面积曾达2000万公顷，减产达到50％以上(姜常松，姜福军，and包信平.(2008)花生蛴螬播种期一次用药全生育期控制技术，现代农业科技，121-123)，甚至绝产，成为目前最重要的地下害虫。花生因蛴螬为害一般情况造成减产20％～40％，严重时可减产70％～80％，甚至绝产，并使花生品质下降大大挫伤了众种植花生的积极性(刘树森，李克斌，尹姣，曹雅忠(2008)蛴螬生物防治研究进展.中国生物防治，168-173；许婷婷，江晨，宫清轩，陈金凤，and曲明静.(2010)青岛市花生田蛴螬发生与无公害防治研究，花生学报，42-44；王振军，郭
志刚，雷晓天，and茹德平.(2010)花生田蛴螬发生原因与防治技术，农业科技通讯，198-200，2010；)。2007年8月中下旬在山东省菏泽地区挖查，蛴螬虫口密度平均为8.7头/m<sup>2</sup>，最高达22头/m<sup>2</sup>(王爱东.(2008)农田蛴螬发生及综合防治技术，现代农业科技)。2003～2007年，在无棣县采取黑光灯诱集与春、夏、秋3季挖土调查相结合的方法。对大田作物进行了随机调查，大豆田、玉米田金龟子分别达5.63和3.00头/m2。大豆田金龟子发生的种类最多，为7种。其中中华弧丽金龟最多，占50.2％，铜绿丽金龟次之，占25.1％。华北大黑鳃金龟第3，占13.0％，其他种类较少。玉米田华北大黑鳃金龟最多，占38.7％，铜绿丽金龟次之，占29.5％，暗黑鳃金龟第3，占14.6％，其他种类较少(田方文，彭彦明，张伟华，and崔少英.(2008)山东省无棣县农田金龟子种类调查及发生规律研究，安徽农业科学，12322-12323)。目前，由于机械化作业的推广，农业生产的耕作制度的改变，比如免耕耕作制度、秸秆还田等技术的推广，给蛴螬带来了舒适的生存环境与丰富的食物，增加了单位面积的虫口数，使得蛴螬危害日益加重，特别是东北、华北和华中地区，给蛴螬的防治带来了困难(裴桂英，马赛飞，刘健，刘保才.(2010)大豆田不同耕作模式对蛴螬发生及产量的影响，科学种养)。
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