(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书 | ||
(10)申请公布号 CN 113388009 A (43)申请公布日 2021.09.14 | ||
(21)申请号 CN202110540920.2
(22)申请日 2021.05.18
(71)申请人 中国科学院福建物质结构研究所
地址 350002 福建省福州市鼓楼区杨桥西路155号
(72)发明人 谢玺 石宁 李博文
(74)专利代理机构 11540 北京元周律知识产权代理有限公司
代理人 周游
(51)Int.CI
C07K14/00(20060101)
C07K19/00(20060101)
C12N15/11(20060101)
C12N15/70(20060101)
权利要求说明书 说明书 幅图 |
(54)发明名称
一种标签蛋白及其编码基因、重组载体与应用 | |
(57)摘要
本申请公开了一种标签蛋白及其编码基因、重组载体与应用。所述标签蛋白为如下A1)或A2)或A3)所示的蛋白质：A1)氨基酸序列为SEQID NO.2的蛋白质；A2)氨基酸序列为SEQ ID NO.2的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加若干氨基酸残基后得到的与SEQ ID NO.2同一性在70％或以上，且与A1)具有相同功能的蛋白质；A3)由A1)和/或A2)进行串联重复、拼接、融合或截短而生成的且与A1)具有相同功能的蛋白质。所述标签蛋白通用性广、助溶性强、分子量适中，可以提高蛋白异源表达的溶解性及活性。 | |
法律状态
法律状态公告日 | 法律状态信息 | 法律状态 |
2021-10-01 | 实质审查的生效 | 实质审查的生效 |
2021-09-14 | 公开 | 公开 |
2022-07-19 | 设置主页授权 | 发明专利权授予 |
权 利 要 求 说 明 书
1.一种标签蛋白,其特征在于,所述标签蛋白为如下A1)或A2)或A3)所示的蛋白质:
A1)氨基酸序列为SEQ ID NO.2的蛋白质;
A2)氨基酸序列为SEQ ID NO.2的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加若干氨基酸残基后得到的与SEQ ID NO.2同一性在70%或以上,且与A1)具有相同功能的蛋白质;
A3)由A1)和/或A2)进行拼接而生成的且与A1)具有相同功能的蛋白质。
2.一种DNA分子,其特征在于,所述DNA分子编码权利要求1所述的标签蛋白。
3.根据权利要求2所述的DNA分子,其特征在于,所述DNA分子为如下a1)或a2)或a3)或4)所示的DNA分子;
a1)编码区包括SEQ ID NO.4的DNA分子;
a2)核苷酸序列是SEQ ID NO.4的DNA分子;
a3)与a1)或a2)限定的核苷酸序列具有70%或以上同一性,且编码权利要求1所述标签蛋白的DNA分子;
a4)在严格条件下与a1)或a2)限定的核苷酸序列杂交,且编码权利要求1所述标签蛋白的DNA分子。
4.一种重组载体,其特征在于,所述重组载体含有权利要求2或3所述的DNA分子。
5.根据权利要求4所述的重组载体,其特征在于,所述重组载体为利用权利要求2或3所述的DNA分子改造的PE
T质粒。
6.B1)或B2)在蛋白异源表达中提高目标蛋白溶解性和/或活性的应用;
所述B1)为权利要求1所述的标签蛋白、权利要求2或3所述的DNA分子、权利要求4或5所述的重组载体;
所述B2)为标签蛋白’,所述标签蛋白’的氨基酸序列与权利要求1所述的标签蛋白的氨基酸序列互为反向;
或所述B2)为DNA分子’,所述DNA分子’编码标签蛋白’;
或所述B2)为重组载体’,所述重组载体’含有DNA分子’。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述标签蛋白’为如下A1’)或A2’)或A3’)所示的蛋白质:
A1’)氨基酸序列为SEQ ID NO.1的蛋白质;
A2’)氨基酸序列为SEQ ID NO.1的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加若干氨基酸残基得到的,与SEQ ID NO.1同一性在70%或以上,且与A1’)具有相同功能的蛋白质;
A3’)由A1)、A2)、A1’)、A2’)中的至少一种进行拼接而生成的且与A1)或A1’)具有相同功能的蛋白质;
所述DNA分子’为如下a1’)或a2’)或a3’)或a4’)所示的DNA分子;
a1’)编码区包括SEQ ID NO.3的DNA分子;
a2’)核苷酸序列是SEQ ID NO.3的DNA分子;
a3’)与a1’)或a2’)限定的核苷酸序列具有70%或以上同一性,且编码标签蛋白’的DNA分子;
a4’)在严格条件下与a1’)或a2’)限定的核苷酸序列杂交,且编码标签蛋白’的DNA分子。
8.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述重组载体’为利用DNA分子’改造的PET质粒。
9.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述蛋白异源表达所利用的表达系统选自无细胞表达系统、原核表达系统、酵母表达系统、昆虫细胞表达系统、植物表达系统、哺乳动物表达系统中的任一种。
10.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述目标蛋白选自Chrono(115-306)、Notch2NL(1-210)、Nclu、NbALFA、CUA63106、BdNEDP1中的任一种。
说 明 书
<p>技术领域
本申请涉及一种标签蛋白及其编码基因、重组载体与应用,属于生物技术领域。
背景技术
原核表达是最便利、最经济快速获得大量活性蛋白的方法,然而其应用也有很多限制。比如缺少修饰、需要去除内毒素、外源蛋白易降解、表达中很多蛋白不能很好的折叠从而严重聚集或者产生包涵体等,其中包涵体或可溶性差是最为棘手的问题。包涵体的产生一般是因为蛋白表达过程中没有很好的折叠、疏水区暴露从而引起大量聚集产生沉淀,表达出的目标蛋白为无活性的不溶性颗粒。最近也有研究表明在大量聚集后有β淀粉样蛋白结构从聚集中产生,并导致决定性的包涵体。
为了解决包涵体问题人们已经采取了许多办法,如降低表达速度、加入额外的分子伴侣共表达、添加信号肽分泌表达、包涵体变复性、开发助溶标签与目标蛋白融合表达等,目前常用的标签蛋白有GST、Trx、Sumo、MBP、NusA等。然而,上面介绍的几种目前主流的标签在助溶效果上很不相同,且都各有其他方面的优缺点,还有一些蛋白使用主流助溶标签都无明显效果。因此急需开发新的助溶标签,这种新的助溶标签不仅具有显著的助溶效果而且具有较高的普适性、分子量还不能太大以免影响目标蛋白产量。
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