氨基酸过瘤胃率三步法
三步法测定过瘤胃氨基酸步骤（3个样品）：（1）第一阶段：瘤胃液法
称取氨基酸样品1g左右（每个样品共6个重复），放入生理盐水瓶（250ml），向每个瓶子分装40ml缓冲液和10ml瘤胃液，摇动混合，向溶液充CO2，使溶液和试管内空间全部充满CO2，然后盖上带有放气阀门的橡皮塞，将其置于水浴摇床培养（39℃），设置好摇床频率，分别于2、4、8、16、24 h，每个时间点取出3个瓶子，倾去上清液，剩余物用自来水冲洗三次，至水澄清，35°C烘干至恒重（48h），移至干燥器内15min后称重，进行剩余物中氨基酸含量（将剩余干燥固体放入15mL离心管中，在90℃（根据不同油脂，熔点不同而温度不同）水浴锅中溶解产品，待其完全溶解，快速完全吸出上层油脂，冷却后将剩余水溶液摇匀，并分装于1.5mL离心管中，待测），从而测定瘤胃降解率。残渣中氨基酸剩余量测定方法为氨基酸自动分析仪法。取出剩余15个瓶子中的剩余物，用自来水冲洗干净，用于下一步试验。
（2）第二阶段：胃蛋白酶法
加入30 mL含有1g/L胃蛋白酶的0.1 N盐酸到瘤胃液处理过的氨基酸样品中，将其置于水浴摇床培养（39℃），培养1h。中国十大名剑
（3）第三阶段：胰酶法
加入3 mL 浓度为1 N的NaOH溶液被加入体系中用以中和pH，每个瓶子加入1.5 ml of 1 N 氢氧化钠，并加入35mL pH为7.8的胰酶磷酸缓冲液，分别于2、4、6、8、12小时，每个样品取出3个瓶
子，过滤，除去滤液，剩余物用自来水冲洗三次，至水澄清，于65°C 烘干至恒重（48h），移至干燥器内15min后称重，进行剩余物中氨基酸含量测定，氨基酸剩余量测定方法为氨基酸自动分析仪法。
尼龙袋法测定包被氨基酸（3个样品）
1.饲养日粮和饲养管理：选用3头安装有永久性瘘管的成母牛进行
实验。参照NRC(1996)标准，配制牛的日粮TMR，每天饲养3次，自由饮水，预试期7天，每一样品正式实验2天。
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2.实验方案：
（1）尼龙袋准备：将过瘤胃产品装袋，称重（W1）。
（2）放袋：在分析样品成分的时候将同一头牛的一个橡皮管不同位置的两个相同样品混合起来，分析的时候，每个样品每个时间
点有三个重复。准确称取3g（W）样品于每个尼龙袋，袋口用
橡皮绳紧紧捆住，将同一个样品的两个尼龙袋上下固定在一根
长约50cm的半软性塑料管中，塑料管同一个位置放一个袋子，一根塑料管放3个袋子，每种产品在每头牛中放入6个袋子，
共2管，管子另一端用尼龙绳子拴在瘘管塞上，共3种产品，
共用3头瘘管牛，也就是每种样品每个时间点有三个重复。（3）放置时间：尼龙袋在瘤胃中停留时间是2、4、6、8、12、24（0即是空白，用作校正由于水流清洗造成的误差，每个样品的空
白做三个重复）在不同的时间分别放入瘤胃中，最后一起取出。（4）冲洗：取出的尼龙袋连同塑料软管立即在自来水下冲洗10min，然后放入水中浸泡55min，然后再漂洗5分钟左右，直至洗涤
的水变清澈为止，然后剪开橡皮绳，除去附着在袋口褶皱上面
的杂物，放入35°C烘箱中48h，待处理。
C、计算方法
剩余氨基酸的测定方法参考三步法瘤胃液法。
待测饲料的瘤胃动态降解率按Ørskov和McDonald(1979)提出的计算模型：
p＝a+b（1－e-ct），用最小二乘法或用fcruve97软件分别算出a、b和c。
如何建立式中：p——t时刻的降解率；
a－一快速降解饲料成份；
b——慢速降解饲料成份；
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c——降解速率常数；
e――自然对数的底；
t——饲料在瘤胃内的停留时间；
a+b――样品的总降解率，不超过100；
1－(a+b)――瘤胃中未降解部分；
100－p――瘤胃后可利用的蛋白质部分
饲料蛋白质降解率与饲料通过瘤胃的流通速度k相关。与k值结合，可计算降解率P，其公式如下所示：
P＝a十bc／(c十k) （K＝0.04）
第一章甜菜碱过瘤胃特性研究
1 材料与方法
1.1 材料和谐家庭事迹材料
过瘤胃甜菜碱购自杭州康德权科技有限公司。
1.2 试验设计及试验动物
1.2.1 试验动物
试验动物选择浙江大学试验牧场杭州正兴牧业有限公司饲养的三只体重相近、装有永久性瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛，日粮采用牛场现行TMR饲喂。每天饲喂三次，自由饮水。
1.2.1 尼龙袋
选用300目孔径大小的尼龙布，制成5×10cm大小的尼龙袋。尼龙袋采用涤纶线进行双道缝合，用电烙铁将边缘散边熨烫，致其密封。试验前将尼龙袋在瘤胃液中平衡72h，取出后洗净并65℃烘干，检查
是否有破损，无破损后可进行后续试验。
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1.2.2 过瘤胃率测定方法
过瘤胃甜菜碱装入每个尼龙袋中。每个尼龙袋装入10g样品。每2袋系于半聚乙稀管，置于瘘管试验牛瘤胃腹囊部。每只羊瘤胃同时放入18个袋，分别于2h、4h、6h、8h、12h和24h从每头牛瘤胃中各取出2个尼龙袋即一根半聚乙烯管，用清水漂洗至澄清，烘干至恒重。计算样品瘤胃降解率。
1.2.3 甜菜碱降解率和有效降解率计算
采用Sharma报道的拟合计算公式，计算甜菜碱的有效降解率（P）。
P＝a+b（1－e-ct），用最小二乘法或用fcruve97软件分别算出a、b和c。
式中：p——t时刻的降解率；
a－一快速降解饲料成份；
b——慢速降解饲料成份；
c——降解速率常数；

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