UPLC/MS/MS操作流程
一、开机
校友门1)分别打开液相谱、质谱和电脑电源，此时质谱内置的CPU会通过网线与电
脑主机建立通讯联系，这个时间大约需要2min；
2寸照片尺寸2)双击桌面上的“MassLynxV4.1”图标进入质谱软件。此时，如果进入软件时
出现提示“The embeded system is not responding. The system will run in standalone mode”, 则说明质谱内置的CPU与电脑主机的通讯联系还未建立，请稍等后再进入软件；
3)点击主界面左侧的“MS Tune”图标，进入质谱调谐窗口，在“Options”下
拉菜单里点击“Pump”此时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真
空；
4)点击真空状态图标，检查真空规的状态，确认真空达到要求（左面真空规
的示数显示1.00e-4）；
5)确认氮气气源已打开，输出压力为90-200psi之间；
经常使用的情况下，质谱处于开机状态，使用之前只需要打开氮气总阀和增压阀，调节输出压力即可。
二、创建项目Project
为了便于进行数据管理，个人可以创建不同的项目（Project），项目的后缀为.pro，每个项目都有对应的子目录进行相应文件的管理：
1)从主菜单中选择“File>Project Wizard”，会引导你去创建一个新的项目；
2)输入项目名称及描述，点击Next进入下一步；
3)选择“Current project as template”，将会把所使用的项目里的方法拷贝到你新
建的项目中去，点击Finish；通过“Existing project as template”选择目标模板，“001.pro”中质谱调谐窗口参数为常规参数，可作为第一次建立项目时的模
板；
4)新的项目会被创建，而且软件会自动切换到新的项目中，每次做实验前，把属
于自己的项目名称调出来使用即可。
三、质谱调谐“MS Tune”方法的建立
对目标分析物首先需要用标准物质进行质谱调谐参数设定，一般采用蠕动泵进样方式，先通过“MS Scan”方式寻母离子的最佳调谐参数，再通过“Daughter Scan”方式来寻子离子及子离子对应的质谱调谐参数：
1）蠕动泵进样方式：用三通阀连接质谱进样口，流动相及蠕动泵进样口一端，将Hamiton250μL进样针抽满样品标液（浓度在1ppm左右）并安装在质谱下方的蠕动泵上；
2）母离子质谱调谐参数设定与优化：在质谱调谐窗口“MS Tune”选择要使用的离子模式，本仪器有电喷雾电离（ESI）与大气压化学电离（APCI）两种电离模式可供选择，其中每种电离模式都有正、负离子模式之分。一般碱性物质和羰基类物质常用ES+模式，酸性类物质、含卤素及含酚羟基物质常用ES-模式；
a) 在界面的右上角选择框选择“MS Scan”方式，在Mass中输入要调谐的样品的母离子质量数（可通过主界面中“Molecular weight Calculator”计算待测样品的分子离子荷质比，选择Monoiso方式计算，得
到单同位素结果），在“Span”中设定扫描宽度，“Gain”为信号放大倍数。
注意：“MS Scan”方式不开碰撞气，且“Analyser”界面中“Entrance，Collision，Exit”（碰撞室出入口电压和碰撞能）应分别设为“50，2，50”；
b) 按下“MS Tune”界面右下角的“Press for operate”（打开高压），状态灯由红变绿，设定泵流速为5-30μL/min，按下注射器图标（syringe），蠕动泵开始转动向质谱输入标液。
c) 母离子质量数确定及参数优化：点击进入“Source”界面，具体参数见表1，使目标峰的强度最大的参数为最优化参数；同时可以通过观察目标峰的中心质量数调整所设定的母离子质量数，将目标样品的母离子质量数精确到小数点后一位；
主要优化参数为“Cone”（锥孔电压），其次为“Capillary”，通过时实查看目标峰强度调整参数值；其他参数一般设置值参见“001.pro”。离骚名句
表1
3）子离子寻及质谱调谐参数设定与优化：样品母离子确定好，参数优化好以后，如实验需要其碎片信息，则需要进一步寻其子离子，同时设定和优化子离子的调谐参数，操作步骤如下：
a)在“MS Tune”界面的右上角选择框选择“Daughter Scan”方式；打开碰撞气，
点击进入“Analyser”界面，进行常规参数设置，如表2；“Entrance，Exit”设为1，“Collision”为最重要的调谐参数，必须大于“Entrance，Exit”；设置“Collision Gas flow”使真空度在2-5e-3之间（一般设在0.15-0.3之间即可）；
b)点击左下角“A cquire”按钮，在其对话框中进行扫描参数设定。选择Function
选择“Daughter Scan”，“Data Format”选择“Centroid”；输入“Start Mass, End Mass(一般稍大于母离子质量数)；“Run Duration Time”为扫描时间，“Scan Time”为一次扫描时间，一般Scan Time＝（End Mass－Start Mass）/1000；Inter Scan Timey两次扫描间隔时间，一般设为0.1即可；设置好后，点击“Start”开始采集信号。
c)点击主界面“Chromatogram”进入谱图查看窗口，点击小闹钟图标，
进行时实查看；优化“Collision”，从小到大（5-100），根据时实信号（右键拖取一段提取质谱信息），寻合适的，稳定的子离子，一般选取两个，信号强的用来定量，弱一点的用来做定性即确证。
六级流程d) 在“MS Tune”界面的右上角选择框选择“Daughter Scan”方式，“Set”中输入
母离子质量数，“Mass”中输入需要优化的子离子质量数，“Span”中输入扫描宽度，以“c)”中的参数为基础，进一步优化“Collision”，同时可适当的优化表 2 中的参数。
最后，将设定优化好的调谐参数保存于自己的项目中，后缀为“.ipr”。
表2
四、质谱方法的建立
通过第一步骤优化好目标分析物的质谱方法后，在Masslynx软件主界面点击“MS Method”图标，进入质谱方法编辑界面。
本仪器具有全扫描（MS Scan）、选择离子反应（SIR）、多反应监测（MRM）、子离子扫描（Daughters）、母离子扫描（Parents）以及中性丢失（Neutral Loss）等多种扫描功能。下面以MRM为例，介绍创建质谱方法的步骤：
1)点击MRM图标，打开MRM功能编辑器“MRM Function Editor”。
2)输入“Parent”（母离子的质量数）、“Daughter”（子离子质量数）、“Dwell，Secs”
（驻留时间）、“Cone，V olts”（锥孔电压）和“Collision Energy，eV”（碰撞能）等参数。
3)点击“Add”，以上输入的值被添加到Function List中，为一个Channel（通道）；
如果还有其他离子对，需要采集在同一张谱图上时，可以继续增加通道，
但过多的通道会降低灵敏度。
4)在“Ionization Mode”下拉菜单中选择离子化模式；在“Retention Windows
（mins）”中输入质谱数据采集时间；在“Inter Channel Delay”中输入通道扫描
间隔时间，一般0.02即可；在“Inter Scan Delay”中输入扫描一次的间隔时间，一般设为0.1即可；“Span”为扫描宽度，一般设为0.2即可，或者根据需要设
置再大一点；点击“OK”；
5)以上为一个Function，如需要增加Function，重新点击MRM图标；
6)从主菜单中选择File> Save As，并输入质谱方法的名称，退出质谱方法编辑
界面。
附：谱峰时间＝Dwell＋Inter Channel Delay＋Inter Scan Delay，谱峰由采
集的质谱数据点合成，一般一个峰10-15个点即可，点数太多导致峰过宽，
可通过调节Dwell来调节点数。
五、液相谱方法的建立
在Masslynx软件主界面点击“Inlet Method”，进入谱方法编辑界面；首先确定Status状态栏显示灯都是绿，然后：
1)在Inlet界面选择流动相，选择所用的流动相，编辑流动相洗脱条件，设定运行
时间，其他参数使用默认值；
2)在Autosampler界面进行进样体积、样品室温度与柱温设置等；（Full loop模式
取40µL进10µL；Partial loop取多少进多少，最多进5µL；Partial loop with Needle Overfill取3倍进样量，最多进7.5µL；具体参见“？”）；
3) 从主菜单中选择File> Save As，输入谱方法的名称，退出谱方法编辑界面。
六、样品运行前准备
1) 排气：在Inlet Method界面ACUUITY Additional Status里点击最右侧的小圆圈
进入ACUUITY UPLC Console控制台；点击控制台左面最上方的ACUUITY UPLC System，从Control菜单栏下的“Start up system”界面中把所
有选折需要排气的管路（一般全选），设置时间，一般1-5min，4cycles，最后
点击“start”进行排气；
2) 平衡：打开柱温箱，装上谱柱，在Inlet Method界面打开方法，点击LC菜
单栏里的“Load method”，流动相则会按方法里的初始比例平衡系统；
3) 质谱条件的准备：确认氮气气源输出已经打开，输出压力为0.6~0.8MPa左右。
点击MS Tune界面上方两个气体快捷键图标打开氮气，确认“Gas Flow”栏里的
气体浮标数值显示正常。点击界面右下角的“Press for operate”操作按钮，按钮
颜由红变绿。当“Source Temp”与“Desolvation Temp”温度达到目标温度，即
可把液相流路接入质谱；
4) 仪器状态确认：开电压，即按下在“MS Tune”右下角的“Press for operate”，状
态灯由红变绿，接入流动相，查看质谱窗口溶剂背景信号强度，如果ES-，ES+
模式下均有e4及以上，说明仪器状态良好；注意：ES+/ES-模式切换过程中
需要先将电压关掉，即使状态处于“Press for operate”状态；
福州疫情最新通告今天5) 在ACUUITY UPLC Console控制台的“Binary Solvent Manager”里查看柱压变
化，当“Delta”显示值小于40时表明柱子已平衡好，可以准备进样了。
七、样品运行
第一步：建立样品表
1)在主界面选择，新建立一个样品表；电风扇 不转
2)输入样品名File name（推荐使用日期命名的方式），File text对每个样品进行
文字性描述，在“MS Tune、MS File、Inlet File”里选择运行样品要使用的质谱、谱方法；
3)在“Bottle”与“Inject V olume”里定义样品瓶号，以及进样体积(1-10µl) ；
4)如果样品表的表头没有显示上述要使用的内容，用鼠标右键点击样品表的第
一行第一列，然后选中“Customize Display”，会出现一个列表，在里面将所需
要用的内容选中；
5)选择样品表表头“Samples”下拉菜单的“Add/Insert”设定要添加/插入的样品数
量；
6)保存，输入这个样品表的名称 (后缀为.SPL)，样品表已经编好等待运行；
第二步：运行样品表
7)点击样品表上方快捷键栏的状态图标“Status”，确认MS和LC已经Ready；
8)选择运行，输入需要运行的样品范围，开始运行样品；如果样品没有开
始运行，请确认暂停键是否被按下；
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