从槐花米中提取芦丁
现代化学实验技术
实验1  从槐花米中提取芦丁
一、目的要求
（1）学习从天然产物中提取黄酮苷的原理和方法。
（2）学习重结晶提纯固体物质的原理和方法。
（3）掌握黄酮苷的纸谱检验操作。
二、实验原理
芦丁又称芸香苷，广泛存在于植物中，其中槐花米中的含量达12%～16%。芦丁有调节毛细血管壁渗透性的作用，临床用作毛细血管止血药，也作为高血压症的辅助药物。芦丁是糖苷类化合物，常含三分子结晶水，呈淡黄针状结晶，熔点为174～178C，无水物的熔点为188C。芦丁在冷水中的溶解度为1:10000，沸水中为1:200；冷乙醇中为1:650，沸乙醇中为1:60；易溶于碱性水溶液，难溶于酸性水溶液，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等。
本实验是利用芦丁易溶于碱性水溶液、酸化后又析出的性质进行提取，并利用它在冷水中和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶提纯。芦丁是糖苷类化合物，其糖苷键在酸性条件下可水解产生对应的甙元——槲皮素，所以芦丁的分离鉴定可用纸谱进行，常用乙酸乙酯:甲酸:水（6:1:3）或正丁醇:冰醋酸:水（4:1:5）作展开剂。
三、主要仪器和试剂
1. 主要试剂
槐花米、石灰乳、浓盐酸、pH试纸、质量分数95%乙醇、展开剂（乙酸乙酯:甲酸:水=6:1:3）、显剂（质量分数2%三氯化铝）、饱和芦丁标准品乙醇溶液、饱和槲皮素标准品乙醇溶液。
2. 主要仪器
250mL烧杯、500mL烧杯、抽滤瓶、布氏漏斗、滤纸、表面皿、毛细管、铅笔、直尺、谱滤纸（中速、20cm×7cm）、谱缸、烘箱、电炉、台平。
四、操作步骤
1. 芦丁的提取
取10g槐花米，置于250mL烧杯中，加入100mL水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH=8～9，在此pH下保持微沸20～30min，趁热抽滤，残渣再加50mL水，同上法再煎一次，趁热抽滤。合并滤液，在60～70C下用浓HCl调至pH=4～5，使沉淀完全，抽滤，沉淀用少量蒸馏水洗涤，抽干，60C干燥得粗芦丁。
2. 芦丁的精制
用水重结晶：将粗芦丁置500mL烧杯中，加入适量蒸馏水，加热煮沸，趁热抽滤。滤液静置，充分冷却，析出芦丁晶体，抽滤，产品用蒸馏水洗涤，70～80C烘干，称重，得芦丁产品。
3. 芦丁的纸谱检验
样品：饱和芦丁自制品乙醇溶液。
对照品：饱和芦丁标准品乙醇溶液和饱和槲皮素标准品乙醇溶液。
支持剂：谱滤纸（中速，20cm×7cm）。
展开剂：乙酸乙酯:甲酸:水（6:1:3）。
显剂：质量分数2%三氯化铝喷雾。
五、实验结果
1、粗芦丁为土黄粉末，精制后的芦丁产品为淡黄粉末。
m(槐花米)/g
m(芦丁)/g
产率/%
10
0.3550
3.5
2、产率：
3、芦丁纸谱显中：在谱中，对照品饱和槲皮素标准品乙醇溶液有明显显现象，饱和芦丁标准品乙醇溶液显不明显；样品饱和芦丁自制品乙醇溶液有显，但其显最高
点和槲皮素显点高度不一致，最低点显不明显。
六、分析与讨论
1、芦丁颜正常，因为粗芦丁中海混有杂质，所以颜较精制后芦丁深。
2、精制芦丁产率较低，可能是因为：乘热抽滤时溶液温度下降，芦丁析出留在滤纸上；还有部分芦丁未从槐花米中煮出；芦丁转移过程中损失等等。
3、实验所需槐花米粉碎太细，导致抽滤十分缓慢，因而本实验后来用纱布代替滤纸。
4、本来还应有一个粗产率，但因为实验考虑不周全，没有测定粗芦丁质量，所以芦丁粗产率无法计算得到。   
5、纸谱显：饱和芦丁标准品乙醇溶液所有组都没有显，可能是制备标准溶液时芦丁浓度太低；槲皮素显正常，没有问题；样品饱和芦丁自制品乙醇溶液显不明显，可能是精制芦丁混有杂质。
实验2  分光光度法测定蔬菜总铁量
一、目的要求
（1）学习邻二氮菲分光光度法测定铁的原理和方法，掌握分光光度计的使用。
（2）掌握标准曲线的绘制方法。
（3）掌握样品的灰化方法及高温炉的使用。
二、实验原理
在紫外-可见区电磁辐射的作用下，多原子分子的价电子发生跃迁，从而产生分子的吸收光谱。各种物质的分子都有其特征的吸收光谱，以此来获得定性的信息。而在选定波长下测量吸光度A与物质浓度c的关系，可对物质进行定量测定。分光光度法测定的基本原理是依据朗伯-比尔定律，即
                     
式中康乃馨的寓意T为透光率；I0为入射光强度；I为透射光强度；l为吸收池厚度；c为浓度；K为吸光系
数。当入射光波长及吸收池厚度一定时，在一定浓度范围内，有物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度由小到大的标准溶液，在指定条件下依次测量各标准溶液的吸光度，在一定浓度范围内，溶液的吸光度与其浓度呈直线关系。以溶液的浓度c为横坐标、相应的吸光度A为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。测定未知试样时，操作条件与标准曲线上的相同，根据测得的吸光度从标准曲线上查出相应的浓度，就可计算出试样中被测物的含量。测定时通常以试剂空白溶液为参比溶液，调校仪器的吸光度零点，即100%透光率。
邻二氮菲也叫邻菲啰啉，是测定微量铁（Ⅱ）的灵敏度高的显剂，在pH=2～9的溶液中，邻二氮菲与Fe2＋生成稳定的橙红配合物。该配合物的lgK稳=21.3，在508nm处有最大吸收，摩尔吸光系数为1.1×104Lmol-1英语专业考研科目cm-1。在pH=2～9之间，颜深度与酸度无关，且在有还原剂存在的条件下，颜深度可保持数月不变。当铁（Ⅱ）浓度在5.0mgL-1以内时，吸光度与Fe2＋浓度呈直线关系。Fe3＋与邻二氮菲能生成淡蓝配合物，lgK稳=14.1，因此在Fe2＋显前应先用盐酸羟胺（或抗坏血酸、对苯二酚等还原剂）将Fe3＋
还原为Fe2＋，以测定总铁量。
三、主要仪器及试剂
1.主要试剂
（1）铁标准溶液：准确称取0.345g分析纯硫酸铁铵[NH4Fe(SO4)212H2O]置于烧标中，加入60mL6molL-1HCl和少量水，溶解后用蒸镏水定容至lL，其浓度为40.0gmL-1。
（2）盐酸羟胺（NH2OHHCl）溶液：质量分数为10%，新鲜配制，两周内有效。
（3）邻二氮菲溶液：质量分数为0.20%，配制时先用少量乙醇溶解，再用水稀释（避光保存），两周内有效，若出现红则不能使用。
（4）醋酸钠溶液（1.0molL-1），HCl溶液(0.1molL-1和6molL-1)。
2. 主要仪器
分光光度计、lcm比皿、25mL比管、10mL吸量管、5mL吸量管、2mL吸量管、lmL吸
量管、l00mL容量瓶、蒸发皿、坩埚、电炉、高温炉、分析天平。
四、操作步骤
1. 蔬菜样品的灰化及灰分液的制备
将蔬菜样品切碎，称取20g置于蒸发皿中，在电炉上慢慢加热炭化至无烟，然后转入坩埚并置于高温炉中，在550C下灰化至无炭粒。称取灰分0.1g（称准至0.001g）于小烧杯中，加入2mL6molL-1HCl，使灰分溶解，再加入6mL0.1molL-1HCl，搅匀，抽滤，再用适量0.1molL-1HCl洗涤烧杯和滤纸，合并滤液和洗涤液，最后用蒸馏水定容至100mL，所得灰分液浓度为0.001gmL-1。
2. 标准曲线的绘制
用25mL比管按下表顺序配制铁标准系列并记录测量数据（注意：加入盐酸羟胺后需摇匀，放置2分钟，再进行下一步操作），以空白液为参比，在508nm波长下测定各溶液的吸光度。在坐标纸上以铁的质量浓度（gmL-1）为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
编号
项目
1
2
3
4
5
空白
铁标准溶液/mL
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
0.00
质量分数10%盐酸羟胺/mL
0.50
质量分数0.20%邻二氮菲/mL
1.00
1.0molL-1NaAc/mL
2.00
蒸馏水
稀释至25mL
吸光度A
0
铁标准溶液质量浓度/(gmL-1)
0.00
二字网名干净
3. 灰分液的测定
在洁净的25mL比管中，加入10.00mL灰分液，再加入0.5巨蟹座的男人0mL盐酸羟胺，摇匀，放置2分钟后加入1.00mL邻二氮菲和2.00mLNaAc溶液，用蒸馏水稀释至25mL刻度，摇匀。以空白液为参比，在508nm波长下测定吸光度。根据测得的吸光度从标准曲线上查出相应的浓度，按下式计算该蔬菜样品铁的含量[g(g干灰)1]。
五、实验结果
1.标准曲线的绘制：
动物奶油和植物奶油的区别哪个好
编号
项目
1
2
3
4
5
适合合唱的励志歌曲空白
铁标准溶液/mL
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
0.00
吸光度A
0.168
0.340
0.496
0.663
0.826
0
铁标准溶液质量浓度/(gmL-1)
0.8006
1.6132
2.4198
3.2264
4.0330
0.00
图 铁标准曲线
2、灰分测定：
A（灰分）
铁质量浓度)/g.mL-1
蔬菜样品铁含量/g(g干灰)-1
0.193
0.9264
2316
六、分析及讨论
   
   

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