化妆品32种禁限用染成分的检测方法和编制说明
化妆品32种禁限用染成分的检测方法和编制说明
化妆品 32 种禁限用染料成分的检测方法和编制说明 附件 2: 化妆品中 32 种禁限用染料成分的检测方法 1 范围 本方法规定了测定染发类化妆品中 32 种禁限用染料成分(见附录 A)的高效液相谱法。 本方法适用于染发类化妆品中 32 种禁限用染料成分的含量测定。本方法无法区分所涉及染料成分的游离态、硫酸盐和盐酸盐，化妆品中各种形态同时存在时，应换算成一种形态，以总量表示。 2 原理 用无水乙醇水11 的混合溶液提取染发类化妆品中的 32 中禁限用染料成分，用高效液相谱仪进行分析，以保留时间和紫外吸收光谱定性，峰面积定量。本方法中 32 种禁限用染料成分的检出限、定量下限及取 0.5g 样品时的检出浓度及最低定量浓度见表 1。 表 1 32 种禁限用染料成分的检出限、检出浓度、定量下限、最低定量浓度 - 1 - - 2 - 3 试剂 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为超纯水。 3.1 无水乙醇。 3.2 甲醇，谱纯。 3.3 乙腈，谱纯。 3.4 亚硫酸氢钠。 3.5 磷酸溶液(19):吸取磷酸(ρ201.69g/mL)10mL，加水 90mL。 3.6 磷酸盐混合溶液:称取十二水合磷酸氢二钠 1.8g、磷酸二氢钾 2.8g 和庚烷磺酸钠(C7H15SO3Na)1.0g，用水稀释至 1L，混匀，配制成含庚烷磺酸钠(1g/L)的磷酸盐缓冲液，加入磷酸溶液(3.5)，调节 pH 至 6.0 左右，0.45m 微孔滤膜过滤。 3.7 染料类化合物标准储备溶液(ρ(染料成分)10g/L):称取染料对照品约 100mg(精确至 0.1mg)于 10mL 容量瓶中，以 2g/L 亚
硫酸氢钠水溶液 无水乙醇(3.1)11的混合溶液定容至 10mL，配成约 10g/L 的单标溶液。以下几种物质在上述溶剂中的溶解性较差，分别采取如下措施:甲苯-25-二胺硫酸盐和 2-氯-p-苯二胺硫酸盐 2 种物质直接用2g/L 亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容;甲苯-34-二胺直接用无水乙醇(3.1)定容;2-硝基-p-苯二胺和 4-硝基-o-苯二胺需将称样量减至 25mg，再用无水乙醇(3.1)定容，配成约2.5g/L 的单标溶液。储备液保存于 0?,4?冰箱中，最多使用 2 天。 4 仪器和设备 4.1 高效液相谱仪，具有二极管阵列检测器。 4.2 pH 计。 4.3 超声波清洗器。 4.4离心机。 - 3 - 5 分析步骤 5.1 样品预处理 称取样品约 0.5g(精确至 1mg)于 10mL 具塞比管中，加无水乙醇(3.1) 水11 的混合溶液至刻度，超声提取 15min。超声过程中，若水温高于 40?应停置降温，冷却后继续超声，直至样品溶液完全均一化。浑浊溶液可取适量高速离心，取上清液经 0.45m 微孔滤膜过滤，滤液作为待测溶液，并尽快测定。 5.2 测定 5.2.1 谱参考条件 谱柱:Supelco DISCOVERY RP-AMIDE C16 柱(250mm×4.6mm，5m)或等同柱; 谱保护柱:Supelco DISCOVERY RP-AMIDE C16 保护柱(20mm×4.0mm，5m)或等同柱; 流动相 1:乙腈(3.3) 磷酸盐混合溶液(3.6)10 90; 流动相 2:甲醇(3.2) 磷酸盐混合溶液(3.6)10 90; 流动相 3:乙腈(3.3) 磷酸盐混合溶液(3.6)40 60; 流量:1.0mL/min; 检测器:二极管阵列检测器; 检测波长:280nm; 柱温:25?。 5.2.2 校准曲线的制备 参照谱图 1谱图 3，对
32 种禁限用染料成分进行分组，并根据分组情况，分别移取适量染料类化合物标准储备溶液(3.7)于 10mL 容量瓶中，用无水乙醇(3.1)稀释至刻度，配成 500mg/L 的混合标准溶液。各取混合标准溶液适量，用无水乙醇(3.1)稀释，配成 10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、250mg/L、500mg/L 共 6 个浓度的混合标准系列。标准系列应于使用前配制。 取各标准系列 5L 注入高效液相谱仪，分别采用 3 种流动相进行分析，记录各谱峰面积，绘制校准曲线。32 种禁限用染料成分在流动相 1 和流动相 2 中的保留时间参考附录B。 5.2.3 样品测定 在设定谱条件下，
天然染发方法取待测溶液 5L 注入高效液相谱仪，分别采用 3 种流动相体系进行分析。谱图检出的物质，经与该物质对照品的保留时间和紫外光谱图比较确证后，根据峰面积，从校准曲线上查得相应组分的质量浓度。若待测溶液中染料成分的质量浓度超过了 - 4 -校准曲线线性范围的上限，需对待测溶液进行适当稀释。 注:实际操作过程中，可参考附录 B 中 32 种禁限用染料成分在流动相 1 和流动相 2 中的保留时间，并结合谱分离情况和样品中染料成分的不同，对 32 种染料成分进行合理分组，使各染料成分获得完全分离。 6 平行实验 按以上步骤，做两份样品的平行测定。在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的 10。 7 结果计算 D V w(染料成分) —————— 100 (1) m 106
式中:w(染料成分)—— 染发类化妆品中染料成分的质量分数，; —— 从校准曲线上查得的待测样液中染料成分的质量浓度，mg/L; V —— 样品定容体积，mL; m —— 样品取样量，g; D —— 稀释倍数(不稀释则取 1)。 8 回收率和精密度 32 种禁限用染料成分的提取回收率在 82 115之间，方法回收率在 86 114之间，相对标准偏差在 1.1 9.9之间。 9 谱图 - 5 - 图 1 第一组染料混合标准溶液谱图，流动相 1 1:p-苯二胺;2:p-氨基苯酚;3:甲苯-25-二胺硫酸盐;4:m-氨基苯酚;5:o-苯二胺;6:2-氯-p-苯二胺硫酸盐;7:o-氨基苯酚;8:间苯二酚;9:2-硝基-p-苯二胺;10:甲苯-34-二胺;11:4-氨基-2-羟基甲苯;12:2-甲基雷琐辛;13:6-氨基-m-甲酚;14:苯基甲基吡唑啉酮;15: NN-二乙基甲苯-25-二胺 HCl;16:4-氨基-3-硝基苯酚 图 2 第二组染料混合标准溶液谱图，流动相 2 1:m-苯二胺;2:24-二氨基苯氧基乙醇 HCl;3:氢醌;4:4-氨基-m-甲酚;5:2-氨基-3-羟基吡啶;6:NN-双2-羟乙基-p-苯二胺硫酸盐;7:p-甲基氨基苯酚硫酸盐;8:4-硝基-o-苯二胺;9:26-二氨基吡啶;10:NN-二乙基-p-苯二胺硫酸盐 图 3 第三组染料混合标准溶液谱图，流动相 3 1:NN-二乙基甲苯-25-二胺 HCl;2:苯基甲基吡唑啉酮;3:6-羟基吲哚;4:4-氯雷琐辛;5:27-萘二酚;6:N-苯基-p-苯二胺;7:15-萘二酚;8:1-萘酚- 6 - 附录 A 32 种禁限用染料成分信息表 - 7 - - 8 - 附录 B 32 种禁限用染料成分在流动相 1 和流动相 2 中的保留时间参考数据表 - 9 - - 10 - 化妆品中 32 种禁限用染料成分的检测方法编制说明 1 任务来源 受国家食品
药品监督管理局保健食品化妆品监管司委托，根据食药监许函2011126 号《关于委托组织开展化妆品中 m-苯二胺等八种禁用物质或限用物质检测方法标准研究的函》和食药监许函2011262 号《关于委托开展化妆品中 24 种染发剂的检测方法研究的函》，开展化妆品中 32 种禁限用染料成分检测方法研究，建立染发类化妆品中多种染料成分的快速、准确、灵敏的谱检测方法。 2 研究背景 染发作为美容方式之一，已经成为一种世界流行的时尚。在英国，染发剂的消费增长率已经连续 8 年高居生活必需品之首。染发剂可分为氧化型(永久性)染发剂、直接型(暂时性或半永久性)染发剂、金属盐类染发剂、天然植物型染发剂等。其中的氧化型染发剂以其染效果好、维持时间长等诸多优点在欧洲和美国占到市场分额的 80。染发剂中的染料成分多属于芳香胺类化合物，芳香胺中有很多物质具有致癌性，所以染发剂的安全性一直受到人们的极大关注。在我国，消费人也不断扩大，由于大面积使用染发剂的时间并不长，目前染发剂引起的各种健康问题并没有引起人们的足够重视，但是染发人出现低龄化，意味着人们染发的时间可能越来越长，而染发剂的各种隐性危害很可能在今

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