新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点
2019新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点
一、适用范围
2019新型冠状病毒核酸检测试剂用于对咽拭子、鼻咽拭子、肺泡灌洗液、痰液、呼吸道洗液、抽吸液或其他呼吸道分泌物等样本中的2019新型冠状病毒核酸进行体外定性检测。本审评要点适用于进行首次注册申报的产品。
二、性能评估:
企业应提交在符合质量管理体系的生产环境下生产的试剂盒进行的所有性能验证的研究资料,包括具体研究方法、实验方案、实验数据、统计分析等详细资料。建议着重对以下分析性能进行研究。
1.核酸(RNA)提取/纯化性能
在进行靶核酸检测前,应有核酸(RNA)提取/纯化步骤。该步骤的目的除最大量分离出目的RNA外,还应有相应的纯化作用,尽可能去除PCR抑制物。无论检测试剂是否含有RNA分离/纯化
的组分,企业都应结合检测试剂的特性,对配合使用的核酸提取试剂/方法的提取效率、提取核酸纯度等做充分的验证,提供详细的验证资料。
2.最低检测限
(1)最低检测限的确定
将含有2019新型冠状病毒的真实临床样本/含有该病毒RNA片段的假病毒颗粒梯度稀释于(与适用样本一致的)适当基质中,用于进行最低检测限研究,应采用科学的方法标定病毒滴度。每个浓度梯度最少重复三次检测,以100%可检出的最低浓度水平作为估计检测限,在此浓度附近制备若干梯度浓度样品,每个浓度至少重复20次检测,将具有90%〜95%阳性检出率的最低浓度水平作为确定的最低检测限。
在进行最低检测限的确定时,应至少包括不同来源的三个具有代表性的2019新型冠状病毒样本,进行系列梯度稀释。
(2)最低检测限的验证
选择不同来源的至少3个病毒样本(与最低检测限确定不同的病毒样本)在最低检测限浓度水平进行验证,应达到90%〜95%阳性检出率。
应提供详细的病毒液滴度的确定方法及验证结果。
3.不同区域病毒样本包容性的验证
至少验证包括具有时间和区域特征性的10个不同来源的病毒样本(阳性临床样本或分离培养物),应包括最低检出限、重复性等性能的验证,病毒样本的滴度应采用科学合理的方法进行标定。
4.分析特异性
(1)交叉反应验证包括:
①地方性人类冠状病毒(HKU1,0C43,N163229E)
SARS冠状病毒、MERS冠状病毒;
H哪些省份需要核酸检测1N1(新型甲型H1NI流感病毒(2009)、季节性HINI流感病毒)、H3N2H5N1H7N9,乙型流感Yamagata>Victoria,呼吸道合胞病毒AB型,副流感病毒123型,鼻病毒ABC组,腺病毒12345755型,肠道病毒ABCD组,人间质肺病毒、人偏肺病毒、EB病毒、麻疹病毒、人巨细胞病毒、轮状病毒、诺如病毒、腮腺炎病毒、水痘-带状疱疹病毒;
肺炎支原体、肺炎衣原体;
军团菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌、金黄葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、肺炎克雷伯菌、结核分枝杆菌;
烟曲霉、白念珠菌、光滑念珠菌、新生隐球菌等。建议在病毒和细菌感染的医学相关水平进行交叉反应
的验证。通常,细菌感染的浓度水平为IO,cfumι或更高,病毒为1O'pfu/ni1或更高,提供所有用于交叉反应验证的病毒和细菌的来源、种属/型别和浓度确认等试验资料。
②人类基因组DNAo
(2)内源/外源物质干扰
应根据所采集样本类型,针对可能存在的干扰情况进行验证。建议申请人在每种干扰物质的潜在最大浓度(“最差条件”)条件下进行评价,在病毒临界阳性水平进行干扰试验验证。检测的潜在干扰物包括样本中的原有物质(如血液、鼻腔分泌物、粘液及用于缓解淤血、鼻噪、刺激或哮喘和过敏症状的鼻腔和咽喉药物、抗菌药物、抗病毒药物等)及在样本采集和制备期间引入的物质。
1推荐用于干扰试验的物质
物质
活性成分
粘蛋白
纯化粘蛋白
血液(人类)
鼻腔喷雾剂或滴鼻剂
苯福林、羟甲嘎琳、氯化钠(含防腐剂)
鼻用皮肤类固醇
倍氯美松、地塞米松、氟尼缩松、曲安奈德、布地奈德、莫米松、氟替卡松
过敏性症状缓解药物
盐酸组胺
抗病毒药物
a-干扰素、扎那米韦、利巴韦林、奥司他韦、帕拉米韦、洛匹那韦、利托那韦、阿比多尔
抗生素
左氧氟沙星、阿奇霉素、头抱曲松、美罗培南
全身性抗菌药
妥布霉素
5.精密度
企业应对精密度指标,如标准差或变异系数等的评价标准做出合理要求。模拟样本并不能体现临床样本可能带来的所有变异因素,因此精密度评价中应同时包含若干临床样本,且精密度评价试验应包含核酸分离/纯化步骤。针对本类产品的精密度评价主要包括以下要求。
(1)对可能影响检测精密度的主要变量进行验证,除检测试剂(包括核酸分离/纯化组分)本身的影响外,还应对分析仪、操作者、地点、检测轮次等要素进行相关的验证。
(2)设定合理的精密度评价周期,例如:为期至少20天的检测或者为期至少5天的检测,具体方案可参考EP文件进行。从而对批内/批间、日内/日间以及不同操作者之间的精密度进行综合评价。
(3)用于精密度评价的人工模拟样品和临床样本均应至少包含3个水平:阴性样品、临界阳性样品、(中或强)阳性样品,并根据产品特性设定适当的精密度要求,临床样本精密度评价中的每一次检测均应从核酸提取开始。
①阴性样本:待测物浓度低于最低检测限或为零浓度,阴性检出率应为100%(n≥20)o
②临界阳性样本:待测物浓度略高于试剂盒的最低检测限,阳性检出率应295%(n≥20)o
③中/强阳性样本:待测物浓度呈中度到强阳性,阳性检出率为100%CVW10%(n≥20)o
6.提供企业参考品验证资料:根据主要原材料研究资料中的企业参考品设置情况,采用三批产品对企业参考品进行检验并提供详细的实验数据。
7.其他需注意问题
对于适用多个机型的产品,应提供产品说明书【适用机型】项中所列的所有型号仪器的性能评估资料。不同样本类型应分别进行性能评估验证.
三、注册检验
应提供符合产品技术要求的、在具有相应医疗器械检验资质和承检范围的医疗器械检验机构进行的产品检验报告,应提供连续3个生产批次样品的检验合格报告。
该项目已有国家参考品,应使用国家参考品进行注册检验。
四、阳性判断值确定资料
阳性判断值确定资料主要指对申报产品病毒核酸检测的Ct值,即结果判断的临界值进行确认的资料。阳性判断值研究资料样本来源应考虑不同年龄、性别、地域等因素,尽可能考虑样本来源的多样性、代表性。如存在判定值灰区,应提供灰区的确认资料。应说明所选择阳性判断值研究方法的合理性,阈值设置应科学合理。提供内标值的确定方法和研究资料。

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