(12)专利镇痛药
（12）专利镇痛药
​甾醇类化合物及总甾醇提取物在制备镇痛药物中的应用的制作方法
专利名称：甾醇类化合物及总甾醇提取物在制备镇痛药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，尤其是天然药物化学领域，具体涉及甾醇类化合物及总甾醇提取物在制备镇痛药物中的应用。
背景技术：
疼痛是一种常见的临床症状，己经成为影响人们生活和工作的重要疾病之一。调查显示，头痛、牙痛、肌肉和关节痛是我国居民最常经历的疼痛，其次为受运动损伤导致的疼痛和经痛。其中，不同年龄
段头痛发生比例都超过了半数；30岁以下以及30-45岁人头痛发生率都超过70%;肌肉关节痛和牙痛。
目前常用的镇痛药可分为两大类，以为代表的阿片类麻醉性镇痛药和以阿斯匹林为代表的非甾体类抗炎药。阿片类镇痛药是中枢神经抑制剂，虽效果明显但易成瘾并产生耐受性。非甾体类抗炎药作用于外周神经系统，是以阻断前列腺素的合成为目的，该类药物长期服用能产生变态反应、胃出血和溃疡。因此，迫切需要寻安全有效的镇痛药物。
从中草药中寻和研制的天然药物，镇痛效果良好，具有疗效好、副作用小、适合长期服用及安全可靠等许多优点，已愈来愈引起人们的重视，成为一个重要的研究发展方向。
甾醇类化合物，尤其是植物中的甾醇类化合物，主要有谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇、以及甾醇糖苷、甾醇酯和酰化甾醇糖苷等。很多植物中都含有甾醇类化合物，在植物中一般以混合物形式3存在。有大量关于甾醇类化合物生物活性的报道。例如，甾醇糖苷具有 补体活化和抗炎活性；包括P -谷甾醇葡萄糖苷和其它P -谷甾醇糖苷 的甾醇糖苷混合物具有免疫调节作用；体内试验表明，甾醇类化合物 对Hashimoto氏甲状腺炎、遗传性过敏症eczema、牛皮癣、哮喘和肿 瘤都有作用。甾醇可降低胆固醇，还可以用于抑郁症(见中国专 利申请200510111265，公开号CN1977848A)。但甾醇类化合物及总 甾醇提取物的镇痛作用未见报道。
发明内容
本发明旨在提供甾醇类化合物及总甾醇提取物的医药新用途，即 甾醇类化合物及总甾醇提取物在制备镇痛药物中的应用，以获得疗效 好、副作用小、安全可靠、能长期服用的镇痛药物。
以天然植物或中草药为原料，可以获得甾醇类化合物或总甾醇提 取物。可用的天然植物或中药包括百合、白芍、大枣、大豆(或大豆 油脱臭馏出物)、牛膝、油菜籽(或菜籽油脱臭馏出物)、小麦(或小 麦麸)等。
采用的工艺包括溶剂提取法、溶剂萃取法、树脂吸附法或二氧化 碳超临界萃取等方法中的一种或多种；并可结合浓縮干燥、减压干燥 或冷冻干燥等常用干燥方法，利用包括吸附树脂柱层析、真空液相柱 层析、硅胶柱层析、Sephadex凝胶柱层析、中低压柱层析以及高压液 相(HPLC)柱层析，和沉淀、结晶等方法进行纯化和精制。
在采用溶剂提取法中，所用溶剂可选用水、甲醇、乙醇、丙醇、 丁醇、戊醇、丙酮、乙酸乙酯、甲酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、乙醚或 石油醚等有机溶剂或两种或多种互溶的混合溶剂，
在室温下浸渍提取 或用超声提取或加热状态下的回流提取，提取次数可为一次，也可为多次。
在采用溶剂萃取法中，可将上述得到的提取物悬浮于水中用合适 的溶剂丁醇、戊醇、乙酸乙酯、甲酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、乙醚或 石油醚等直接进行萃取，萃取次数可为一次，也可为多次。
上述的树脂法为大孔吸附树脂法，水、醇或含水醇提取物可用大 孔吸附树脂进行处理，弃去水洗脱部分，全部或部分收集醇洗脱部分 即得。
所采用的二氧化碳超临界萃取法可根据情况加入适当的夹带剂， 如环己烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇或乙醇等。 本发明所述甾醇类化合物为甾醇。
所述甾醇类化合物为谷甾醇(Sitosterol)、豆甾醇(Stigmasterol)、 菜油甾醇(Campesterol )菜籽甾醇(brassicasterol )、胆甾醇
(cholesterol)、菠菜甾醇(spinasterol)、岩藻甾醇(flicosterol)、羊 毛甾醇(lanosterol)、燕麦甾醇(avenasterol)、禾本甾醇(gramisterol)、 多孔甾醇(poriferasterol)、菌甾醇(flingisterol)、扶
桑甾醇(rosasterol)、 苋菜甾醇(amasterol)、粪甾醇(epicoprosterol )、刺松藻甾醇
(codisterol)、钝叶甾醇(obtusifoliol)、蚬甾醇(corbisterol)、粉苟 苣甾醇(chondrilla sterol)、链甾醇(desmosterol)、桐甾醇(clerosterol)、 或大戟甾醇(euphorbosterol)等来源于植物的甾醇。
所述总甾醇提取物是指由天然植物或中药中通过上述提取分离 方法得到的含有上述一种或一种以上甾醇类化合物的提取物，其中总 甾醇含量在50 90%。
以甾醇类化合物或总甾醇提取物作为制备镇痛药物的有效成份， 可单独应用或者合用或与可接受的赋形剂等结合，按照常规方法制成 口服剂型或非口服剂型的疼痛的药物。
5试验结果表明，甾醇类化合物或总甾醇提取物都具有明显的镇痛 效果，可用于制备镇痛药物；且具有明显疗效，副作用小，安全可靠， 能够长期服用。
具体实施例方式
实施例1 甾醇类化合物e-谷甾醇提取分离
取百合科植物百合的干燥鳞茎(叶)片lkg，用80%乙醇回流提 取，浓縮浸提液得乙醇提取物，提取物混悬于水中，用石油醚萃取， 浓縮得石油醚提取物，石油醚提取物上硅胶柱层析，正己烷-乙酸乙
酯梯度洗脱，氯仿甲醇溶液中结晶，得到e-谷甾醇。
实施例2大枣中甾醇类化合物的提取分离
取千燥大枣用80%乙醇回流提取，浓縮浸提液得乙醇提取物，提 取物混悬于水中，用乙酸乙酯萃取，浓縮得乙酸乙酯提取物；将乙酸 乙酯提取物混悬于5%氢氧化钠水溶液中，用乙酸乙酯萃取，萃取物 上硅胶柱，正己烷-氯仿-甲醇梯度洗脱，洗脱馏分放置或甲醇重结晶， 得到P -谷甾醇和P -谷甾醇葡萄糖苷。
实施例3 白芍中甾醇化合物的提取分离
取白芍饮片，用85%乙醇回流提取，浓縮浸提液得乙醇提取物， 提取物混悬于水中，用石油醚萃取，浓縮得石油醚提取物，石油醚提 取物上硅胶柱层析，正己烷-乙酸乙酯梯度洗脱，氯仿甲醇溶液中结 晶，得到卜谷甾醇。
实施例4 百合中总甾醇提取物的提取分离
取百合科植物百合的干燥鳞茎(叶)片，用80%乙醇回流提取， 浓縮浸提液得乙醇提取物，提取物混悬于水中，用氯仿萃取，将氯仿萃取物溶液丙酮中，过滤，丙酮溶液浓縮干燥后，加甲醇热熔，放置 一定时间后，过滤，收集沉淀物，干燥，得百合总甾醇提取物。
实施例5 大豆中总甾醇提取物的提取分离
将大豆脱臭馏出物溶于乙酸乙酯，用5%氢氧化钠萃取，水系， 浓縮干燥后热熔于甲醇，放置，滤出沉淀既为总甾醇提取物。
实施例6 牛膝中总甾醇提取物的提取分离
取干燥牛膝，粉碎，用80%乙醇回流提取，提取物混悬于水中， 以乙酸乙酯萃取，萃取液再用5%氢氧化钠洗涤后，用甲醇热熔放冷 沉淀，反复多次的牛膝总甾醇提取物。
实施例7 菜籽油脱臭馏出物中总甾醇提取物的提取分离
将菜籽油脱臭馏出物溶于一定浓度的热甲醇或乙醇中，放置，结 晶。经多次重复结晶，滤出
沉淀既为总甾醇提取物。
实施例8 甾醇类化合物镇痛作用试验
选用e-谷甾醇和豆甾醇为代表，应用于小鼠扭体实验以验证甾 醇类化合物镇痛作用。
操作方法为取18 22g小鼠30只，随机分为三组，分别按体 重100mg/kg、 30mg/kg和10mg/kg 口服给药，给药组样品液0.6m1/ 只；另设对照组给等体积生理盐水。60分钟后，各鼠腹腔注射0.7% 醋酸0.1ml/10g，观察并记录10分钟内产生扭体反应的动物数或每组 扭体反应的次数，与对照组比较其镇痛效果。同时以阿米替林为比较， 结果见表l。表1. 甾醇类化合物小鼠扭体试验结果
化合物剂量(mg/kg)对照组扭体次数实验组扭体次数抑制率(％)P值
e-谷甾醇10po36.3±8.132.1±6.911.6>0.05
30po26.4±12.626.4>0.05
訓po18.6±4.148.8O.001
豆甾醇10po42.3±8.433.4±8.620.9>0.05
30po27.5±8.135.0<0.01
100po32.7±10.222.7<0.05
阿米替林 (Amitriptyline)15po8.6±4.676.3O.001
以上实验表明，甾醇类化合物如p-谷甾醇和豆甾醇等具有镇痛 作用。
实施例9菜籽油脱臭馏出物总甾醇提取物镇痛作用试验
取实施例7的菜籽油脱臭馏出物总甾醇提取物，进行小鼠醋酸扭 体实验，操作方法同实施例8，同时以阿米替林为比较，结果如表2。
表2.甾醇提取物小鼠扭体试验结果
剂量(mg/kg)对照组扭体次数实验组扭体次数抑制率 (%)P值
菜籽油脱臭馏 出物总甾醇提 取物10 po39.0±8.529.6±5.524.0<0.05
30 po22.7±9.541.8<0.01
圃po21.3±5.945.5<0.01
300 po22.5±2.642.3<0.01
阿米替林 (Amitriptyline)15 po10.7±7.372.6<0.01
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权利要求
中草药申请专利1、甾醇类化合物及总甾醇提取物在制备镇痛药物中的应用。
2、 权利要求1所述的甾醇类化合物及总甾醇提取物在制备镇痛药物 中的应用，其特征在于，所述甾醇类化合物为甾醇。
3、 权利要求1所述的甾醇类化合物及总甾醇提取物在制备镇痛药物 中的应用，其特征在于，所述总甾醇提取物是从百合、白芍、大枣、 大豆、大豆油脱臭馏出物、牛膝、油菜籽、
菜籽油脱臭馏出物、小麦 或小麦麸中提取得到的含有一种或多种甾醇类化合物的提取物，其中 总甾醇含量为50-90%。
4、 权利要求2所述的甾醇类化合物及总甾醇提取物在制备镇痛药物 中的应用，其特征在于，所述甾醇为谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜 籽甾醇、胆甾醇、菠菜甾醇、岩藻甾醇、羊毛甾醇、燕麦甾醇、禾本 甾醇、多孔甾醇、菌甾醇、扶桑甾醇、苋菜甾醇、粪甾醇、刺松藻甾 醇、钝叶甾醇、蚬甾醇、粉苞苣甾醇、链甾醇、桐甾醇或大戟甾醇。
5、 权利要求2所述的甾醇类化合物及总甾醇提取物在制备镇痛药物 中的应用，其特征在于，所述甾醇为谷甾醇或豆甾醇。
6、 权利要求1至5任一项所述的甾醇类化合物及总甾醇提取物在 制备镇痛药物中的应用，其特征在于，所述药物以一种或多种甾醇类 化合物、或总甾醇提取物作为活性成分，单独应用，或者加上药学上 可接受的赋形剂制成的口服或非口服制剂。

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