实时荧光定量PCR 核酸检测在献血者HIV 病毒筛查中的应用价值分析
２０２１年６月　第１１期影像学及诊断检验实时荧光定量ＰＣＲ核酸检测在献血者ＨＩＶ病毒筛查中的应用价值分析
邵长年
山东省济宁市中心血站，山东 济宁 272100
【摘要】目的：研究在献血者人类免疫缺陷病毒(HIV)筛查中通过实时荧光定量PCR核酸检测的应用价值。方法：抽取本站于2019年9月到2020年9月，此期间接受HIV病毒筛查的献血者共640例，对其血液样本均采用核酸测定(NAT)与酶联免疫吸附剂测定(ELISA)方式，其中核酸检测采用PCR-实时荧光定量法。结果：NAT阳性样本19例，HIV病毒筛查阳性率为2.97%；ELISA阳性样本15例，HIV病毒筛查阳性率为2.34%；ELISA阳性、NAT阴性标本7例，约占1.09%；ELISA阴性、NAT阳性标本为11例，约占1.72%。ELISA或NAT检测结果呈阳性的26例血液样本进行复检，共有23例确认为HIV感染。与ELISA(+)NAT(-)相比，ELISA(-)NAT(+)、ELISA(+)NAT(+)的HIV病毒检出率更高；且与ELISA(-)NAT(+)相比，ELISA(+)NAT(+)的HIV病毒检出率更高。结论：实时荧光定量PCR核酸检测对于提高HIV病毒筛查准确率，提高临床输血安全性等有十分重要的意义。
【关键词】献血者；筛查；应用价值；HIV病毒；实时荧光定量PCR核酸检测
[中图分类号]R440  [文献标识码]A  [文章编号]2096-5249(2021)11-0153-02
由于异体输血可能会造成艾滋病等传染病的传播，而艾滋病是一种由HIV病毒引发的感染性疾病，传染性与致死率较高[1]。而对献血者血液样本进行筛查，是降低HIV感染的有效方式，可杜绝由于输血导致的疾病感染[2]。有相关报告指出，将实时荧光定量PCR核酸测定应用于献血者HIV病毒筛查中，收效较为理想[3]。可排除HIV 病毒阳性血液，降低输血传播病毒的风险，使血液使用更加安全。在此次实验中，对640例接受HIV病毒筛查的献血者的血液样本筛查结果开展对比，旨在探讨献血者HIV病毒通过不同检测方式的筛查效果及价值，现将此次结果阐述如后。
1　资料与方法
1.1一般资料　选取本站于2019年9月到2020年9月，此期间接受HIV病毒筛查的献血者共640例进行观察研究，献血者中女性312例、男性328例，年龄20～37岁，平均年龄(26.59±
2.42)岁，对其血液样本均采用NAT测定与ELISA测定方式，其中核酸检测采用PCR-实时荧光定量法，研究项目均在医学伦理委员会监督下进行操作，全部接受HIV病毒筛查的献血者签署知情同意书。
1.2方法　献血者需在清晨空腹抽取5 mL静脉血，做两支标本，对标本进行离心处理，时间为10 min，转速为3000r/min，之后将血清放置于具有标记试管中待检。①实时荧光定量PCR核酸检测：通过德国GFE试剂盒中的autoX磁珠法病毒核酸提取试剂盒进行HIV病毒核酸提取，后使用HIV病毒筛选试剂盒，取探针混合液(0_C/0-B)与底物混合液(BM)配制HIV PCR反应混合液，将其加入96孔PCR反应板的扩增
反应管，取相应体积提取的病毒核酸模板和阳性、阴性对照品，放入扩增反应管中，关闭PCR反应板，以1500 g离心60 s，然后将其放入荧光定量PCR仪中，进行扩增反应与测定，检测试剂盒有上海源物科技有限公司提供。其中内标阳性者，表示该标本为阳性，判为不合格。②ELISA法：采用ELISA法对献血者抗HIV检查，主要仪器与试剂包括抗HIV检测试剂(上海荣盛生物有限公司)。试剂盒内附阳性与阴性对照试剂。检测设备主要包括SM-3酶标仪、全自动酶联免疫分析仪与自动洗板机等，检测严格按照试剂盒操作使用说明进行。具体评判标准：若S/CO≥1，表示该标本为阳性，判为不合格。另外，对于抗HIV检出阳性者，需重新采集血液样本经由权威实验室再次检测确认。
1.3观察指标　记录ELISA和实时荧光定量PCR核酸检测结果; 记录ELISA或NAT检测阳性者复检结果，随访ELISA(+)NAT(-)、ELISA(-)NAT(+)、ELISA(+)NAT(+) 血样。
1.4 统计学方法　数据纳入SPSS23.0软件分析，计数资料(ELISA和实时荧光定量PCR核酸检测结果、复检结果)用%表示，卡方检验，若(P<0.05)则认为有研究意义。
2　结果
2.1献血者的ELISA和实时荧光定量PCR核酸检测结果　对比640例HIV病毒筛查样本中，NAT阳性样本19例，HIV病毒筛查阳性率为2.97%；ELISA阳性样本15例，HIV病毒筛查阳性率为2.34%；ELISA阳性、NAT阴性标本7例，约占1.09%；ELISA阴性、NAT阳性标本为11例，约占1.72%，如表1所示。
表1　ELISA和实时荧光定量PCR核酸检测结果比较[例(%)]方法ELISA(+)ELISA(-)合计
NAT(+)8(1.25)11(1.72)19 (2.97)
NAT(-)7(1.09)614(95.94)621(97.03)
合计15(2.34)625(97.66)640(100.00)
2.2ELISA或NAT检测阳性者复检结果对比　ELISA 或NAT检测结果呈阳性的26例血液样本进行复检，共有23例确认为HIV感染。与ELISA(+)NAT(-)相比，ELISA(-) NAT(+)、ELISA(+)NAT(+)的HIV病毒检出率更高；且与ELISA(-)NAT(+)相比，ELISA(+)NAT(+)的HIV病毒检出率更高，如表2所示。
表2　ELISA或NAT检测阳性者复检结果比较(例，%)组别例数检出例数检出率ELISA(+)NAT(-)7571.43
ELISA(-)NAT(+)111090.91#
ELISA(+)NAT(+)88100.00#@注：#代表与ELISA(+)NAT(-)相比，P<0.05；@代表与ELISA(-)NAT(+)相比，P<0.05。
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153医学食疗与健康
２０２１年６月　第１１期影像学及诊断检验
3　讨论
输血作为救治患者的多用手段之一，可用于术中出血量较大的患者，在临床相关疾病的中具有广泛的应用价值[4]。艾滋病等输血相关传染病的控制与预防已经成为社会关注焦点，艾滋病作为由HIV病毒引发的感染性疾病，将严重威胁人类的健康。而对献血者血液样本进行筛查，是降低HIV感染的重要途经，可降低疾病医源性传播率[5]。
既往，临床主要采用ELISA法进行HIV病毒筛查，该检测方式具有操作简单、成本低廉等优点，且结果便于读取、保存，用于传染疾病标志物的检测具有较为理想的效果。但该检测方式可受到多种因素影响，检验数据不够准确。随着信息技术的进一步发展，实时荧光定量PCR核酸测定逐渐运用于HIV病毒筛查中，其作为一种体外模拟自然DNA复制过程的技术，通过加热变性、退火、延伸等反应步骤不断循环，完成DNA扩增放大，并应用荧光信号累积实现整个PCR进程实时监测，有利于缩短病毒检测窗口期，降输血风险[6]。在此次实验中，ELISA 阳性、NAT阴性标本7(1.09%)例；ELISA阴性、NAT阳性标本为11(1.72%)例，对ELISA或NAT检测结果呈阳性的26例血液样本进行复检，共有23例确认为HIV感染。与ELISA(+)NAT(-)相比，ELISA(-)NAT(+)、ELISA(+)NAT(+)的HIV病毒检出率更高；且与ELISA(-)
NAT(+)相比，ELISA(+)NAT(+)的HIV病毒检出率更高，提示实时荧光定量PCR核酸测定的应用效果更佳，具有方便、简单、价格便宜等优点，有利于排除HIV病毒阳性血液，降低输血传播HIV病毒的风险，使血液使用更加安全。
研究结果表示，实时荧光定量PCR核酸检测对于提高HIV病毒筛查准确率，提高临床输血安全性等有十分重要的意义。值得将其普及推广于临床诊断工作中。
参考文献
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(收稿日期：2021-1-28  接受日期：2021-3-21)
表1　对两组患者护理后的抑郁度及焦虑度进行分析
(x±s)
组别例数
SDS SAS
护理前护理后护理前护理后
对照组7262.06±3.2237.31±3.0664.18±3.0939.06±2.94观察组7263.08±3.2031.43±3.1262.25±3.0531.08±2.75
2.2对两组患者护理后生活质量进行对比　观察组生活质量各项评分都要优于对照组(P<0.05)，详见表2。
表2　两组患者生活质量各项评分比较(分，x±s)
组别例数生活自理能力心理承受
能力
手机上怎么查核酸检测结果
食欲睡眠
观察组72  3.21±0.87  3.71±0.80  2.91±0.60  3.33±0.50对照组72  2.18±0.59  2.90±0.49  2.36±0.40  2.77±0.28
2.3对两组患者并发症进行对比　观察组护理后并发症发生率要低于对照组(P<0.05)，详见表3。
表3　两组护理后并发症发生率比较
组别例数尿潴留腰背疼痛穿刺部位
出血
精神不振
并发症
发生率
观察组721(1.39)2(2.78)1(1.39)0(0.00)4(5.56)
对照组723(4.17)5(6.94)2(2.78)5(6.94)15(20.83) 3　讨论
原发性肝癌的发病率较高，且致死率也较高，严重的危害到患者的生命。原发性肝癌，一般采用肝动脉栓塞术进行，同时配合护理，使效果达到最大。观察组患者采用优质护理，优质护理从患者的术前心理状态，患者术中舒适护理及患者术后的护理指导等安眠对患者进行护理，各阶段周密的护理，不仅消除了患者不良的心理状态，还提高了患者的满意度。而对照组患者采用常规护理，该护理较为传统，无法对患者进行各个阶段的护理，导致患者心理焦虑度排解较低，影响手术的效果，并且患者护理后舒适度也较低，患者满意度不高。
综上所述，对行肝动脉栓塞化疗术(TAE)的原发性肝癌患者采用优质护理，不仅能够获得较高的护理效果，患者护理后的生活质量也得到提高，并发症减少，护理方法较为有效。
参考文献
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作者简介：张悦(1982.07-)，女，汉族，河北省新城县人，大学本科，副主任护师，研究方向：内科(肝
病)护理学。
(收稿日期：2021-1-31  接受日期：2021-3-23)
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154医学食疗与健康

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