液相谱- 串联质谱法检测水发产品中氨基脲
doi:10.16736/jki41-1434/ts.2022.14.044
液相谱-串联质谱法检测水发产品中氨基脲Determination of Semicarbazide in Waterish Logged Food Products by Liquid
Chromatography-Tandem Mass Spectrometry
◎ 白亚敏1,2，陈世奇1,2，唐韵熙1,2，江 生1,2，兰玉坤1,2
（1.重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121；
2.国家市场监管重点实验室（调味品监管技术），重庆 401121）房屋赠与
BAI Yamin1,2, CHEN Shiqi1,2, TANG Yunxi1,2, JIANG Sheng1,2, LAN Yukun1,2
(1.Chongqing Institute for Food and Drug Control, Chongqing 401121, China;
2.Key Laboratory of State Market Regulation (Condiment Supervision Technology), Chongqing 401121, China)
摘 要：目的：建立液相谱-串联质谱测定水发产品中氨基脲的分析方法。方法：样品经水洗涤除杂后，
利用1 mol·L-1盐酸水解，邻硝基苯甲醛衍生反应，乙酸乙酯提取，正己烷净化，Waters-C18谱柱分离，经乙腈（含0.1%甲酸）-10 mmol·L-1乙酸铵水溶液（含0.1%甲酸）梯度洗脱，电喷雾正离子（ESI+）扫描，内标法测定。结果：氨基脲衍生物在0.5～20.0 μg·kg-1呈良好的线性关系，r＞0.999，水发产品中氨基脲检出限为0.15～0.18 μg·kg-1，平均回收率为73.9%～88.0%，RSD为3.2%～8.6%。结论：该方法重现性好，灵敏度高，定量准确，可用于水发产品中氨基脲的测定。
关键词：液相谱-串联质谱法；水发产品；氨基脲
Abstract：Objective: An analytical method for the determination of semicarbazide in waterish logged food products was established and validated based on liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Method: Samples were washed with water, hydrolyzed with 1 mol·L-1 hydrochloric acid, and then derivatized by 2-nitrobenzaldehyde. After extracted by ethyl acetate, and purified by hexane, the samples were loaded into C18 column, and separated with acetonitrile (0.1% formic acid)-10 mmol·L-1 ammonium acetate aqueous solution (0.1% formic acid) as the mobile phase. The electrospray ionization in positive ion mode (ESI+) was operated, and the internal standard method was used in the detection. Result: There was a good linear relationship in the range of 0.5～20.0μg·kg-1 concentration, r＞0.999. The detection limits were 0.15～0.18μg·kg-1, the average recovery was 73.9%～88.0% and the RSD was 3.2%～8.6%. Conclusion: The method is sensitive, h
igh repeatability and is accurate in determination of semicarbazide in waterish logged food products.
Keywords：liquid chromatography tandem mass spectrometry; waterish logged food products; semicarbazide
中图分类号：O657.63
氨基脲是呋喃西林在动物体内的代谢物，同时也是甲壳类水产品中的内源性物质及发泡剂偶氮二甲酰胺的高温分解产物[1-4]。大量研究结果表明，氨基脲对实验动物的生殖系统、内分泌系统和免疫系统有多效性影响和改变，具有致畸性、致突变性和致癌性。氨基脲可通过食物链进入人体，影响人体健康，造成严重后果。因此，欧盟、美国、加拿大和日本等国家和组织均将呋喃西林列为动物食品中的禁用药物[5]。我
基金项目：国家市场监督管理总局科技计划项目（S2019MK463）。
作者简介：白亚敏（1977—），女，硕士，高级工程师，研究方向为食品检验。
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图1标准溶液质量谱图
1.3.3溶液的制备
（1）标准溶液的制备。精密称取氨基脲约10 mg，置入100 mL容量瓶，乙腈定容，摇匀，制成100 μg·mL-1
的氨基脲标准储备溶液。准确移取200 μL氨基脲储
备溶液于100 mL容量瓶中，乙腈定容，摇匀，制成200 ng·mL-1的氨基脲标准工作溶液。
（2）内标溶液的制备。精密称取氨基脲-13C-15N2标准品约10 mg，置入100 mL容量瓶，乙腈定容，摇匀，
配制成100 μg·mL-1的氨基脲内标储备溶液。准确移
取100 μL氨基脲内标储备溶液于100 mL容量瓶中，
乙腈定容，摇匀，制成100 ng·mL-1的氨基脲内标溶液。
（3）供试品溶液的制备。将毛肚、鸭肠及黄喉样品分别均质制样备用。称取2.0 g（精确至0.01 g）样品置于50 mL离心管中，分别用10 mL水洗涤两次，加入100 μL氨基脲内标溶液，涡旋混合50 s，再加入1 moL·L-1盐酸溶液20 mL和0.3 mL邻硝基苯甲醛衍生溶液，振荡涡旋1 min，37℃条件下置于恒温水浴中避光振荡反应。16 h后取出样品，冷却至室温，用1.0 moL·L-1磷酸氢二钾溶液调节pH至7.0
～7.5，再加入5 mL乙酸乙酯，振荡涡旋2 min，移取上清液至离心管中，残留液中再加入5 mL乙酸乙酯，振荡涡旋后取上清液，合并上清液，40℃氮吹近干。准确加入1.0 mL水和2 mL正己烷，振荡涡旋溶解残余物，6000 r·min-1离心8 min，取下层清液过0.22 μm滤膜，待HPLC-MS/MS检测。
2　结果与分析
2.1 样品前处理条件的优化
毛肚等水发产品中通常含有偏磷酸盐、焦磷酸盐等磷酸盐类保水剂，样品溶解于水后会形成一种缓冲盐体系，影响样品溶液的pH值调节，因此先将样品用水洗涤两次以除去其中的部分磷酸盐，但仍有部分磷酸盐不能完全去除。动物源性样品通常用0.2 moL·L-1的盐酸调节样品溶液的pH值，在酸性环境中水解蛋白质，提取其中呈结合态的氨基脲，用0.2 moL·L-1的盐酸调节水发产品样品溶液时，pH值并无太大变化。因此，将盐酸溶液的浓度调整为1 moL·L-1，可使样品溶液的pH值调节至0～0.5，实验结果表明，使用1 moL·L-1盐酸能达到水解需要的酸性环境，检测结果较好。
2.2 谱条件及质谱条件的优化
氨基脲分子量较小，用邻硝基苯甲醛与氨基脲进行衍生反应，将待测物分子量增加至209，可大幅提升检测灵敏度。氨基脲衍生物为氨基脲缩对醛基苯甲酸，呈弱碱性，适用于正离子监测模式。流动相
采用含0.1%甲酸的乙腈-乙酸铵溶液进行梯度洗脱，甲酸和乙酸铵有助于形成待测物分子离子，提高离子化效率，增强质谱的灵敏度，同时还可改善质量谱图峰形。由于大多数谱柱不耐受强酸，流动相选择0.1%甲酸浓度。流动相中的离子也会抑制待测物在离子源内形成分子离子，降低氨基脲衍生物的响应，因此只采用10 mmoL·L-1乙酸铵浓度。
采用50 ng·mL-1的氨基脲衍生物进行母离子扫描，确定质荷比209.2的氨基脲衍生物分子离子，再进行子离子全扫描，选出响应强度最高的两个子离子m/z192.1和m/z166.2，其中m/z166.2作为定量离子。最后以多反应监测模式对碰撞电压和去簇电压进行参数优化，优化结果见表1。
2.3 方法学考察
2.3.1检出限及线性关系晒老公的红包短句说说
为减少样品基质对质谱灵敏度的影响，选用与样品相同基质的阴性样品提取液作为溶剂，准确配制氨基脲衍生物系列标准溶液。分别称取不同基质阴性样品6份，每份约2.0 g，分别置于50 mL离心管中，均加入适量1 moL·L-1盐酸溶液，涡旋30 s后，分别加入氨基脲标准工作溶液5 μL、10 μL、20 μL、
图2样品质量谱图
50 μL、100 μL和200 μL，添加浓度分别为0.5 μg·kg-1、1.0 μg·kg-1、2.0 μg·kg-1、5.0 μg·kg-1、10.0 μg·kg-1和20.0 μg·kg-1，再加入氨基脲内标工作溶液100 μL（即内标含量为5.0 μg·kg-1），涡旋混合50 s，余下操作同1.3.2。以氨基脲衍生物的定量离子对的峰面积对浓度作图，绘制标准曲线，经实际加标确定方法检出限，结果见表2。
表2线性关系、回归方程和检出限表
样品基质线性范围/μg·kg-1线性回归方程相关系数检出限/μg·kg-1毛肚0.5～20.0Y=0.61863x+0.036970.99960.16
鸭肠0.5～20.0Y=1.02889x+0.031370.99920.15
黄喉0.5～20.0Y=1.16264x+0.031700.99910.18
2.3.2回收率
均质后的毛肚、鸭肠、黄喉阴性样品，分别称取18份，
高、中、低3个浓度各6份，添加不同浓度的氨基脲标
准溶液，按上述方法处理样品并测定，进行回收率试验，
3种基质氨基脲的回收率为73.9%～88.0%，RSD为
财务试用期工作总结3.2%～8.6%，见表3。
表3水发产品中氨基脲的回收率表
样品基质添加水平
/μg·kg-1
平均回收率
/%
RSD/%开药店需要什么手续
日内日间
毛肚0.577.24.18.6科尼赛克agera
1.073.94.85.4 5.075.83.34.3
鸭肠0.576.75.77.0
1.083.44.08.5 5.081.93.57.3
黄喉0.579.33.67.2
1.080.55.15.3 5.088.03.26.8
2.4 样品测定
利用本文建立的方法，对市场上100余批毛肚、鸭肠和黄喉等水发产品进行了测定。其中有13批为阳性样品，氨基脲检出含量为2.35～18.41 μg·kg-1。
3 结论
本文利用液相谱-串联质谱技术建立了快速、准确的水发食品中氨基脲的检测方法，其准确度和重复性均满足痕量分析的需求。毛肚等水发食品中的氨基脲残留不仅是养殖过程中使用了呋喃西林，还与生产加工过程中使用的次氯酸盐消毒有关。水发产品生产企业需加强原料进货查验和生产过程控制，尽量减少氨基脲污染给人体健康带来的安全隐患。
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