ＤＯＩ：１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２１．０２．１７·质量管理研究·
不同核酸提取方法和新型冠状病毒核酸检测试剂室间质评结果分析
余汉忠１，牛璐璐１，孔倩倩１，李小川２，蔡佩君２，王丽１（１．中国矿业大学附属医院徐州市第一人民医院检验科，江苏徐州２２１００９；２．中国矿业大学化工学院，江苏徐州２２１００９）
摘要：目的 分析２种不同核酸提取方法和２种新型冠状病毒核酸检测试剂检测室间质评样本的结果，进行性能比较。方法
收集２０２０年江苏省临床检验中心和国家卫生健康委临床检验中心发放的新型冠状病毒核酸检测室间质量评价样本共１５份，用２种常用核酸提取方法（磁珠法、核酸释放剂法）、２个厂家实时荧光定量ＰＣＲ核酸扩增检测试剂检测，进行质评物核酸
2022年高考分数查询提取和扩增，根据不同试剂组合检测结果比较相关试剂性能。结果 根据国家卫生健康委员会临床检验中心和江苏省临床检验中心结果反馈，１５份质评样本中，包括１０份新型冠状病毒核酸阳性样本，５份阴性样本。核酸磁珠提取法＋Ａ厂家核酸检测试剂阳性质评样本ＯＲＦ１ａｂ和Ｎ基因检出率均为１００．００％，双基因同时检出率均为１００．００％，有效检出率为１００．００％；核酸释放剂法＋Ｂ厂家核酸检测试剂阳性质评样本ＯＲＦ１ａｂ检出率为７０．００％，Ｎ基因检出率为９０．００％，双基因同时检出率为
７０．００％，有效检出率为９０．００％；核酸磁珠提取法＋Ｂ厂家核酸检测试剂阳性质评样本ＯＲＦ１ａｂ和Ｎ基因检出率均为１００．００％，双基因同时检出率均为１００．００％，有效检出率为１００．００％。３种试剂组合对阴性质评样本均为未检出，阴性结果符合率均为
１００％。结论 不同核酸提取方法及核酸检测试剂对质评样本检测结果不同，核酸释放剂法的核酸提取性能有待提高。
关键词：新型冠状病毒；室间质评；核酸检测；核酸提取方法
中图分类号：Ｒ４４６．５ 文献标志码：Ａ
２０１９新型冠状病毒（２０１９ｎｏｖｅｌｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ，
alwaysonline是什么意思２０１９ ｎＣｏＶ）核酸检测在疫情防控中至关重要。各厂家快速研发的各种核酸提取和检测试剂盒并不
稳定［１］，在检测前需要进行充分的性能验证及试剂比对，并积极开展实验室间的室间质评比对活动，才能确保检测结果的准确和可靠。本研究对徐州市第一人民医院ＰＣＲ实验室采用的２种核酸提取方法和２种２０１９ ｎＣｏＶ核酸检测试剂检测室间质评样本的结果进行比较分析，结果报道如下。
１ 资料与方法怎么删除ie浏览器
１．１ 样本 ２０２０年江苏省临床检验中心５月１７日发放的２０１９ ｎＣｏＶ核酸检测室间质量评价样本５
份（样本号：２０９６０１、２０９６０２、２０９６０３、２０９６０４、
２０９６０５）和２０２０年国家卫生健康委临床检验中心６月１７日发放的２０１９ ｎＣｏＶ核酸检测室间质量评价
样本１０份（样本号：２０２００１、２０２００２、２０２００３、２０２００４、２０２００５、２０２００６、２０２００７、２０２００８、２０２００９、２０２０１０）。
１．２ 仪器与试剂 ＳＬＡＮ ９６Ｐ全自动荧光ＰＣＲ仪（上海宏石公司），ＡＷ １０００全自动核酸提取仪（江苏硕世公司）；新型冠状病毒（２０１９ ｎＣｏＶ）核酸检测试剂盒（批号：２０２００３０２）、磁珠法核酸提取试剂盒（批号：ＳＤＫ６０１０５）源自江苏硕世公司（Ａ公司），新型冠状病毒（２０１９ ｎＣｏＶ）核酸检测试剂盒（批号：２０２００７６）、核酸释放剂（批号：２０２００４３）源自湖南圣湘公司（Ｂ公司）。
１．３ 方法 接收室间质评样本当天即进行检测。根据《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术
指金边白菜是什么菜系
南（第五版）》［２］要求进行生物安全防护。根据核酸提取和扩增试剂的不同，分为３种组合。组合１：Ａ公司磁珠法核酸提取试剂＋核酸检测试剂，组合
２：Ｂ公司核酸释放剂＋核酸检测试剂，组合３：Ａ公司磁珠法核酸提取试剂＋Ｂ公司核酸检测试剂。
１．３．１ 核酸提取 （１）磁珠法：用Ａ公司核酸提取试剂盒及ＡＷ １０００全自动核酸提取仪，质评样本
充分混匀后，吸取２００μＬ加入相应深孔板第一列，放入提取仪，选择相应程序自动提取；（２）核酸释放剂法：八联管中加入１０μＬＢ公司样本核酸释放剂，质评样本充分混匀后，吸取１０μＬ加入八联管，
基金项目：２０２０年中国矿业大学新型冠状病毒（２０１９ ｎＣｏＶ）防治科研攻关应急专项资助项目（２０２０ＸＧＹＪ０２）。 作者简介：余汉忠，１９８５年生，男，副主任技师，硕士，主要从事分子诊断学研究。
通信作者：王丽，主任技师，Ｅ ｍａｉｌ：ｊｓｘｚｗｄｌ＠１６３．ｃｏｍ。
充分混匀，静置１０ｍｉｎ。均按照试剂说明书进行。１．３．２ 核酸扩增 用ＳＬＡＮ ９６Ｐ全自动荧光ＰＣＲ仪及核酸检测试剂，根据试剂说明书配制反应体系并设置反应程序，进行扩增检测及检测结果判定。Ａ公司核酸检测试剂ＰＣＲ反应体系共２５μＬ，包括ＲＴ ＰＣＲ反应液７．５μＬ，酶混合液５μＬ，新冠三重反应液４μＬ，去ＲＮＡ酶Ｈ２
Ｏ３．５μＬ，核酸模板样本量５μＬ。ＰＣＲ扩增参数为：逆转录５０℃
３０ｍｉｎ；
预变性９５℃５ｍｉｎ；变性９５℃４０ｓ，退火、延伸、测荧光５５℃４０ｓ，
４５个循环。结果判读：ＦＡＭ（ＯＲＦ１ａｂ）、ＲＯＸ（Ｎ）、ＨＥＸ（内标）
３个通道Ｃｔ≤３５且扩增曲线为Ｓ形曲线者，
判定为该基因检测结果为阳性；Ｃｔ＞３８判定为该基因检测结果为阴性；３５＜Ｃｔ≤３８判定为该基因结果为检测灰区，
需复查，复查后若２次检测结果都在“灰区”
，
则判断为检出，取２次结果的平均值作为上报结果Ｃｔ值。Ｂ公司核酸检测试剂的ＰＣＲ反应体系共５０μＬ，
包括ＲＴ ＰＣＲ反应液２６μＬ，酶混合液４μＬ，核酸模板样本量２０μＬ；ＰＣＲ扩增参数为：
逆转录５０℃３０ｍｉｎ；
预变性９５℃１ｍｉｎ；变性９５℃１５ｓ，退火、延伸、测荧光６０℃３０ｓ，４５个循环；冷却
２５℃１０ｓ。结果判读：ＦＡＭ（ＯＲＦ１ａｂ）、ＲＯＸ（Ｎ）、ＨＥＸ（内标）
３个通道Ｃｔ≤４０且扩增曲线为Ｓ形曲线者判定为该基因检测结果为阳性，Ｃｔ＞４０判定为该基因检测结果为阴性，扩增曲线异常时需复查。１．３．３ 质量控制 试剂盒自带阴性和阳性对照，若阴性和阳性对照检测结果在控，则该批次试验结果有效；若阴性和阳性对照检测结果不在控，则该批次试验结果无效。设置环境评估样本１个，为阴性
对照开口放置于ＰＣＲ实验室Ⅱ区过夜，
用质评样本检测方法检测，评估有无环境污染。
红领巾心向党资料２ 结果
本实验室根据标准操作规程进行操作后结果
良好，阴性对照、阳性对照、环境评估样本均在控制范围内。根据国家卫生健康委临检中心和江苏省临床检验中心的室间质评结果回报，除２０９６０２、２０９６０４、２０２００１、２０２００６、２０２００８号样本为双位点未检出外，其余室间质评样本均为双位点阳性。３种试剂组合对阴性质评样本均为未检出，阴性结果符合率均为１００％，对阳性质评样本各基因的检出结果见表１。
表１ 不同试剂组合对阳性质评样本的检出率分析［ｎ（％）］
实验方法
阳性质评样本数（
ｎ）不同基因检出率ＯＲＦ１ａｂＮ双基因
同时检出率有效检出率
磁珠法＋Ａ公司核酸检测试剂１０１０（１００）１０（１００）１０（１００）１０（１００）核酸释放剂法＋Ｂ公司核酸检测试剂１０７（７０）９（９０）７（７０）９（９０）磁珠法＋Ｂ公司核酸检测试剂
什么是理事会１０
１０（１００）１０（１００）１０（１００）
１０（１００）
３ 讨论
准确的２０１９ ｎＣｏＶ病原鉴定对新型冠状病毒
肺炎疑似患者方案的确定、感染的控制都发挥着关键作用［３ ４
］。本研究选取了徐州市第一人民医院现在使用的２种２０１９ ｎＣｏＶ核酸检测试剂及２种提取方法对室间质评样本进行分析。从实验结果可以看出，磁珠法提取的核酸用Ａ和Ｂ公司核酸检测试剂检测的有效检出率都能达到１００％。但Ｂ公司核酸释放剂法提取后的核酸使用Ｂ公司核酸检测试剂对阳性质评样本ＯＲＦ１ａｂ基因的检出率
为７０％，Ｎ基因检出率为９０％，说明核酸提取效果不佳。而磁珠法提取的核酸再用Ｂ公司核酸检测试剂检测质评样本的结果表明，所有阳性样本的Ｃｔ值均小于其他２种组合，说明此试剂组合对室间质评阳性样本均能更灵敏地检出靶基因［５
］。本实验仅对２种某一批号的试剂用国家卫健委临检中心和江苏省临床检验中心的室间质评样本作了简单的比较分析，因为样本量较少，可能并
不代表２种试剂的整体检测能力。目前国内疫情
放缓，研究对象缺乏，若能获取大数量的阳性样本，可以对不同提取和扩增试剂进行更全面的评价。
４ 参考文献
［１］熊丹，阚丽娟，王萌萌，等．七种国产新型冠状病毒核酸检测试剂盒的一致性和检出能力评价研究［Ｊ］．中华检验医学杂志，２０２０，４３（８）：７８７ ７９３．［２］林铃，李太生．国家卫生健康委员会《新型冠状病毒感染的肺
炎诊疗方案（试行第五版）》解读［Ｊ］
．中华医学杂志，２０２０，１００（００）：Ｅ００１ Ｅ００１．［３］王旭东，施健，丁伟峰，等．２０１９新型冠状病毒核酸检测的研
究状况与应用探讨［Ｊ］．临床检验杂志，２０２０，３８（２）：８１ ８４．
［４］张瑞，李金明．如何减少新型冠状病毒核酸检测的“假阴性”［Ｊ］．中华医学杂志，２０２０，１００（００）：Ｅ００８ Ｅ００８．［５］陈克平，徐百泉，李丽．Ｃｔ值与浓度对数在ＨＢＶ核酸定量检测
室内质控中的作用［Ｊ］．临床检验杂志，２０１０，２８（４）：３１０ ３１１．
（收稿日期：
２０２０ ０９ １４
）（本文编辑：
刘）
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