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(收稿日期：2912-69-79)
DOI：12・3966/j・issn・16726963・2227・22.222•妇科与生殖医学•
妊娠糖尿病孕妇肠道乳杆菌属和双歧杆菌属水平
与糖脂代谢指标的相关性
张永妍、△李佳杰3陈轶尘2
5宁波大学医学院附属医院妇产科，浙江宁波512202
2宁波市医学科学研究所药物与药理科研室，浙江宁波512202
［摘要】目的探讨妊娠糖尿病（GDM）孕妇肠道乳杆菌属和双歧杆菌属水平和糖脂代谢指标的相关
性。方法选择2016年5月至2018年1、月在宁波大学医学院附属医院常规体检并确诊为GDM的孕妇77
例作为研究对象。将这76例孕妇设为GDM组。另选择同期在宁波大学医学院附属医院常规体检的76例
非GDM孕妇作为对照组。比较两组的基线资料以及血糖、血脂、肠道乳杆菌属和双歧杆菌属水平，应用
Pearson相关性分析乳杆菌属和双歧杆菌属与GDM组的血糖、血脂的相关性。结果两组的年龄、孕前体重
指数（BM））、孕周等基线资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。两组的血清空腹血糖（FPG）、OGTT9
血清葡萄糖（（h-PG）、0GTT2h血清葡萄糖（2h-PG）、总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白胆固醇
（HDL-P）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-P、比较，差异具有统计学意义（P<0.05）；GDM组的乳杆菌属和双
歧杆菌属水平明显低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。GDM组肠道乳杆菌属水平和FPG、lh-
PG、2h-PG、TC水平呈明显负相关（o=-0.535、-0.526、-0.634、-0.543,P=0.400），与HDL-C水平呈明
显正相关（o=0.503,P=0.000）；双歧杆菌属水平和FPG、lh-PG、2h-PG、TG、LDL-C水平呈明显负相关（=
-0.534、-0.544、-0.643、-0.623、-0.53、，P=0.000）。结论GDM孕妇肠道乳杆菌属和双歧杆菌属的
降低可能与其糖脂代谢紊乱存在一定的相关性，其具体机制需经进一步研究。
［关键词】妊娠糖尿病；肠道菌；糖脂代谢
［中图分类号】R714［文献标识码】A
△[通讯作者】张永妍,E-mail:sxzyyheju@126
Correlation betweec the leveis of LactobaciVus and BifiVobacterinm and the parometed of glucasn and lipin metabolism in pregnant womee with gestational diabetes mellitus ZHANG Yonnyan^,LI Jiajie1,CHEN Yichen. 1.DepartmenO cf Obstetrict nd Gyanolopa,AfiPamP Hospitnl ep MeOicnl Schoo f Ninnbo UnPersip,Ninn-bo315000,Zhejiann,Chinn；2.Department pf皿纟也让淞onn Pharmncolopy,Ninnbo MePicnl Ocience Research hnsp-tute r Ninnbo315000,ZhejUng,Chinn
【Abstroct]Objective To investigate the re/UoxsPip betweeo the levels of LacUbocU b s and BiOdoPacUd-um and the parameters of glucose and lipid meubolism/prepnaut womeo with yesmtUxol diabeUs mel/tus (GDM).Methods4prepnaut womeo diagnosed with GDM wheo received puUnc physical examinatiox in the Af-F/aUd Hospital of Medical School,Ningbo University from Moy2210to November241were selected os the research subjects and assigned to the GDM yppp.4nox-GDM ppynant women who underweot puUnc physical ou-aminatiox/the Affi/ated Hospital of Ningbo University were seUcted os the coxtroi yppp.Baseline data and bloob gbcose,bloob lipid,inUstinoi LacUbocU b s and BiOdobacUWum levels of the two yppps were compared,and Pearsox corre/Oox was used to ana/ec the corre/Oox betweeo LacUbocUbs and BiOdobacUdum and bloob gbcose and bloob lipid of the GDM yppp.ResnUs There was no significant diOereoce betweeo
the two amups/age,pp-ppp-nancy boby mass index(BMI),yestaOoxal ape nd other baseline data(P>2.45).The diOereoces/FPG,lh-CG, 2h-PG,Utoi cholesUrci(TC),trig/cedde(TG),high deosiR lipoproUin cholesterol(HDL-C)and low deosity lip-oproUin cholesUrci(LDL-C)betweeo the two yppps were smtisticaOp significant(P<2.25、.The levels of Lac/bo-cillus and BifidobacUdum/GDM group were significant/lower than those/coxtroi yppp,and the diOereoce was smtisticaOp significnt(P<2.25).The level of inUsUnoi LactobacUbs/GDM yppp was significanUp nepaOvelp corre/ud with the levels of FPG,lh-PG,20-PG and TC(c=-2.335,-2.520,-2.634,-2.248,P=2.002), and positive/correlated with the level of HDL-C(=0.308,P=0.000).The level of biOdobacUWum was nepaOvelp corre/ted with the levels of FPG,lh-PG,20-PG,TG and LDL-C(c=-2.534,-2.244,-2.34(,-2.60(, -2.28(,P二2.2(0).Conclusions The decrease of LactobacUbs and BifidobacUdum/prepnant womeo with GDM may be re/ted to the disorder of gbcose and lipid metabolism,and the specific mechanism needs further stuPy.
【Key wordsi GestatioxO diabeUs mel/tus;InUsUnoi Fora；Gbcose and lipid meubolism
近年来，妊娠糖尿病(aeU//xO yiabetes meU/uyGDM)的发病率逐年上升，据相关研究报道，我国部分地区GDM的发病率已高达1.7%41。目前，该病的发病机制尚不明确，临床普遍以体重指数(boby mass index,BMI)大于259c/m6作为GDM的危险因素，但其特异性较低4。近年来，越来越多的学者认
为，肠道菌和糖尿病、肥胖等代谢性疾病的发生、发展密切相关，肠道菌可能成为预防、糖尿病的有效方法之一卩」。相对于正常人，糖尿病患者肠道菌的多样性欠佳，乳杆菌属和双歧杆菌属与糖尿病患者的血脂代谢具有一定的相关性⑷。GDM作为一种特殊类型的糖尿病，目前，临床上关于该类患者和肠道菌研究报告较为鲜见。本研究旨在探讨GDM孕妇肠道乳杆菌属和双歧杆菌属水平与糖脂代谢指标的相关性，现报告如下。
1对象与方法
1.7研究对象
选择2416年5月至241年1月在宁波大学医学院附属医院常规体检并确诊为GDM的孕妇76例作为研究对象。将这76例设为GDM组。另选择同期在宁波大学医学院附属医院常规体检的76例非GDM孕妇作为对照组。纳入标准:①GDM组符合2414年中华医学会《妊娠合并糖尿病诊治指南》中GDM的诊断标准日；
②已签署知情同意书;③孕24~28周，单胎。排除标准:①妊娠前糖尿病;②合并严重肝、肾等器质性病变;③精神异常;④近-个月使用过益生菌、合生元、益生元和抗生素等;⑤近-个月有痢疾、腹泻等胃肠道病史;⑥近期有手术史、感染等;⑦滥用药物或长期服用激素;⑧既往有CusUmg综合征、甲亢等影响糖脂代谢。本研究已经获得宁波大学医学院附属医院伦理委员协会的批准。
1.2试剂及仪器
实时荧光定量仪(thewxQ5，美国、，超微量分光光度计(thew mc-noioPpp，美国、，普通PCR仪(thewnc-vetriu，美国)，凝胶成像仪(Bio-Rad，美国、，2xTaq PCR Mastee MU(博凌科为，中国、，SYBR Greeo(BioTedc，美国、，粪便细菌DNA提取试剂(Mpbic，美国、，琼脂糖凝胶DNA提取试剂(Roche，德国)，全自动生化分析仪(conU Ur bechma/，美国、，糖化血红蛋白分析仪(Siemeos，德国)。
乳杆菌属和双歧杆菌属的引物由北京奥克鼎盛生物科技有限公司设计合成，乳杆菌属上游引物片段为5'-TGGAA-CAGATGATGCTAATACCG-3S下游弓【物片段为5'-GTCCAATGT-GGATGATTCG-3S双歧杆菌属的上游引物片段为5,-GATTCT-GCCECAGGATCATCGC9S下游弓【物片段为5,-GTCATACGAGC-CGAGGCCAT9S
1.8研究方法和评价指标
1.8.(基线资料的收集由经过统一培训并合格的研究人员采用流行病学的调查问卷方式，对孕妇进行面对面的询问调查，内容包括年龄、孕前BMI、孕周、孕次、生产次数等，用标准方法测定患者血压，并记录。
1.8.0血糖、血脂的测定抽取孕妇的空腹静脉血24mL, 8005r/min离心l/min后，应用全自动生化分析仪测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C、、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C、、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)水平。所有孕妇均参加75g口服葡萄糖耐量实验(OGTT)，运用全自动生化分析仪测定血清空腹血糖(FPG)、
OGTT 6血清葡萄糖(16-BG )、OGTT 20血清葡萄糖(2hKG )。).3.3粪便细菌DNA 的测定 粪便总DNA 的提取：每例孕妇采 取5 ~5g 粪便标本，液氮保存运送至实验室，实验室操作人员于20
内应用粪便细菌DNA 提取试剂提取粪便总DNA，利用超微量分光
光度计测定DNA 的纯度和浓度合格后，-22t 保存。乳杆菌属和
双歧杆菌属DNA 的制备：实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)分
析。每次试验使用ddH 2O 做阴性对照海个样品同时做7个平行 复孔，取标准品做6倍稀释后进行PCR，反应体系为22m L，其中目
标细菌上下游引物各0 5咽、7咽<1<1巴0、6咽SYBR premd 、2|jiL
粪便细菌总DNA，具体反应条件详见表1，制作溶解曲线。
表9乳杆菌属和双歧杆菌属的反应条件
菌属变性
退火
延伸
- 循环(次)
温度(七)
时间( e )
温度(七)
时间( e )
温度(七)
时间( e )
乳杆菌属
951555
37723
4双歧杆菌属95
15
6969
75
45
35
).4 统计学处理
采用SPSS 22. 4软件对相关数据进行统计分析。计量资料采
用t 检验，以均数士标准差(4±$)表示；计数资料采用X 7检验，以频
数(百分数)J(% )］表示；采用Peavoo 相关性模型分析不同指标
间的相关性，检验水准为4.45;P<4.45表示差异具有统计学意义。 2结果
7. 0 两组肠道乳杆菌属和双歧杆菌属水平比较
GDM 组的乳杆菌属和双歧杆菌属水平明显低于对照组，差
异具有统计学意义(P<4. 45) o 具体结果详见表5o
7. 3 两组基线资料比较
两组的年龄、孕前BMI 、孕周等基线资料比较，差异无统计学意
义(P >4. 45)。两组的 FPG 、6-PG 、2h-PG 、T C 、T G 、HDL-C 和 LDL-B
比较，差异具有统计学意义(P <0 45) o 具体结果详见表7o
表7两组基线资料比较［x±s/«(%)］
项目
GDM 组
(x = 77 )对照组
(x = 76 )
tY 6值P 值
年龄(岁)29. 57 ±3.0728. 99 ±3.57049339. 325
孕前 BMI ( ky/m 7)26 53 ±2. 97
21457±3412
044459. 657孕周(周)20. 36 ±6 0827. 91 ±2. 93
149379. 955孕次(次)
9.299
9. 969
9
35(46. 95 )37(48.68 )127(35. 53 )24(31453
2
7(9.21)7( 9421鼻37(9.21)
3(10453
产次(次)
9.953
9. 621
9
58(76. 32 )61 ( 30426
112(15793(10453鼻2
6( 739
7( 9421
收缩压(mmHg )11121±1354110474±12499042139. 827
舒张压(mmHg )
7135±354
69473±3465 1.2349. 216FPG( mmol/L)499±1594435±144324609
9. 916lh-BG ( mmol/L )1134±3437456±2412
342159. 0092h-PG( mmol/L )
9. 54 ±3.915439±14761241339. 009TC (mmol/L )
5. 93 ±6 45
4445±1439
2. 429
9. 916TG( mmol/L )6 72 ±9. 511453±0449243429. 921HDL-B( mmol/L )
9. 89 ±9. 24
1423±0439
644739. 009LDL-B (mmol/L )3497±14293412±0497 4.591
9. 009
注：1 mmHg = 9. 133kPv
表9两组肠道乳杆菌属和双歧杆菌属水平比较(CFU/g , ±/
组别
例数
乳杆菌属
双歧杆菌属
GDM 组
76 5. 87 ±6 3919. 2 ±2. 36对照组
76
9. 56 ±6 47
16 54 ±2. 57
£值
3. 163 3.374P 值
9. 092
9. 091
7.3 GDM 组肠道乳杆菌属和糖脂代谢的相关性
GDM 组肠道乳杆菌属水平和FPG 、lh-PG 、2h-PG 、TC 水平
呈明显负相关5 = -4.535、-4.526、-4.634、- 4.548,P = 0 004)，与HDL-C 水平呈明显正相关(s =4. 545,P =4. 004)，与
TG 、LDLK 不存在明显相关性(=-464、-068,P=2.108、
0 455 ：o 具体结果详见表4。
/4 GDM 组肠道双歧杆菌属和糖脂代谢的相关性
GDM 组肠道双歧杆菌属水平和FPG 、lh-PG 、2h-PG 、TG 、
LDLK 水平呈明显负相关(=-4.534、- 4.544、- 4.646
-4. 07)I -4. 55),P=4.404)，与 TC 、HDL-C 不存在明显相关性 (=-0 621、0 324,P= 0 455、0 328)。具体结果详见表5。
表4 GDM 组肠道乳杆菌属和糖脂代谢的相关性
项目
厂值
P 值
FPG
-9.535
7.0061h-BG -7.5209.0092hKG -9. 9349.009TC
-9. 5489 .009TG -9. 134
9 . 168HDLCC 9.5939 .009
LDLCC
-9. 138
9.953
表5
GDM 组肠道双歧杆菌属和糖脂代谢的相关性
项目
厂值
P 值
FPG
-9.5349 .0091h-BG -9. 5479 .0092hKG -9. 9419 .009TC
-9. 0919 .455TG -9. 9219 .009HDLCC 9. 12
9 . 128LDLCC
-9.531
9 .009
3讨论
近年来，随着人类后基因组的发展，肠道菌作为人体的共生菌已成为当前研究热点，其在人体营养吸收、免疫系统等重要生理过程中发挥着重要作用J]。目前，研究发现，肠道菌与糖尿病、肥胖等多种代谢性疾病中均呈现一定的相关性⑺。有研究表明，乳杆菌属和双歧杆菌属等益生菌与7型糖尿病患者的能量代谢平衡方面有着紧密联系，作为人和动物肠道中的两种正常菌，其数量和糖尿病的糖脂代谢密切相关J]。GDM是一种特殊类型的糖尿病，相关研究显示,GDM可增加孕妇及胎儿并发症和后代糖尿病的发生率⑼，而在我国现存的医疗环境下，临床医学是该病的研究重点，该病基础医学的研究报告较为缺乏。
本研究结果显示,GDM组的血糖、血脂和对照组具有显著性差异，与研究报告一致W.。在GDM组中，乳杆菌属水平明显降低，且与FPG、、h-PG、2h-PG、TC水平呈负相关，与HDL-C水平呈正相关E]。乳杆菌是厚壁菌门的一种G+菌属，是肠道菌中的正常菌之一，可有效分界乳糖和蛋白质，并在糖尿病和其并发症中具有一定的保护作用。Guimardes K等研究显示，乳杆菌属可竞争性的抑制有害菌的生存，增强机体的免疫功能，并对血脂代谢具有一定的影响。有研究报道，口服补充乳杆菌属可显著性增高成年人HDL-C水平，降低血清TC水平何。Temewa LD等何在一项研究中发现，高脂饮食喂养的肥胖小鼠中，乳杆菌属的含量下降，而血清TC水平上升，乳杆菌属可通过对胆盐的解共轭作用而减少肠肝循环中胆汁酸的含量从而降低TC水平。同时，有研究发现，与对照组相比，糖尿病妊娠患者
肠道乳杆菌属数量明显降低，空腹血糖明显降低，与本研究结果基本一致。分析其原因，可能为糖尿病患者中的肠道黏膜不适合乳杆菌的生存，由于肠道中乳杆菌的缺乏而导致血糖进一步升高。
本研究结果进一步显示，相较于对照组,GDM组双歧杆菌属水平明显降低，且其与FPG、、h-PG、2h-PG、TG、LDL-C水平呈负相关。有研究表明，双歧杆菌具有明显的降低血糖和血清胆固醇作用，可调节糖脂代谢紊乱。在双歧杆菌微生态剂对7型糖尿病大鼠模型的实验中，双歧杆菌灌胃组大鼠的血糖值明显降低,TG含量明显低于对照组，说明双歧杆菌能较好程度的改善糖尿病大鼠的糖脂代谢R.。BaungOts E等研究报告显示，在2型糖尿病组中，双歧杆菌含量明显低于对照组，且其水平与高血脂具有一定的负相关性，这一结果与本研究结果相似。值得注意的是，有研究报道，双歧杆菌属的数量与空腹血糖的水平呈正相关，相对于正常人，糖尿病患者中双歧杆菌属的分布量明显增多，与本研究结果相反。考虑可能机制为肠道微生态系统的研究方法太过繁多，微生态系统本身太过复杂，造成各项研究结果不尽相同。
综上所述,GDM孕妇肠道乳杆菌属和双歧杆菌属的降低可能与其糖脂代谢紊乱存在一定的相关性，其具体机制需经进一步研究。
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(收稿日期：27199995)
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