2020新冠病毒核酸检测标准操作流程
2020新冠病毒核酸检测标准操作流程
2020新冠病毒核酸检测标准操作流程
在当前肺炎疫情期间，需要开展核酸检测的医疗机构，需要科学、规范、有效地做好生物安全防护及开展核酸检测工作。为此，各实验室可结合自身条件和流程，制定适宜的生物安全防护和核酸检测方案。
核酸检测流程
一）核酸检测前的生物安全防护（工作人员个人三级防护的穿戴）
穿戴流程：
在基因扩增实验室的清洁区或者普通实验室的洁净区，工作人员按顺序依次穿戴好一次性帽子、医用N95口罩、一次性防护服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防护目镜和双层乳胶手套，进入样本处理工作区域或实验室。
要点提示】
标准基因扩增布局条件的实验室应在清洁更衣区做好个人三级防护，条件有限的实验室可以在一洁净的实验室中按流程穿戴好个人三级防护。
工作人员需佩戴医用N95口罩，若无医用N95口罩，可以考虑用普通N95/KN95口罩外加一次性外科口罩的组合方式，但不要佩戴有呼吸阀的N95口罩。
佩戴N95口罩时需检查密闭性，通过双手按压、深呼吸、左右转头等动作严格检查口罩是否佩戴正确。
一次性防护服已具备核酸检测的防护需求，有条件时可以考虑加穿一次性反穿隔离衣，穿衣时需由他人协助。
穿戴整齐的工作人员，应按要求尽快进入样本处理的实验区域开展工作，严禁穿戴三级防护后再进入普通实验区域或办公区域。
二）样本的灭活处理
操作流程：
两名完成三级防护的工作人员，进入样本处理区或样本处理专用实验室，将接收到的样本二级包装在安全柜内打开，检查样本主是否为严格密闭；对密封袋表面进行消毒后，对送检样本进行56℃下30分钟的灭活，灭活后的样本管需在生物安全柜内打开最内层的，将拭子保存液混匀后进行分装和用于核酸提取。
要点提示】
涉及高致病性病原微生物的实验室活动，需由两名工作人员完成，其中一人负责主要实验操作，一人提供必要的协助。主操作者应避免反复多次进出安全柜。
灭活形式可以采用水浴或空气加热形式完成灭活，采用空气加热时可适当延长灭活时间。有条件时可以采用小型化设备在安全柜内操作，减少样本进出安全柜的次数。灭活前的样本严禁在生物安全柜外打开和操作。
应特别检查采样管是否拧紧、有无样本溢漏等情况。
样本管每次进出安全柜均需对外表面进行消毒。
建议在实验操作过程中配备适量的消毒处理物品，以防止意外溢洒事故发生。如果有条件，可以在安全柜内配备一次性吸水台布。接下来介绍样本的核酸提取操作流程。
手工核酸提取操作流程分为以下几个步骤。首先是裂解液的配制，需要在基因扩增实验室的试剂配制区或单独的普通试剂配制实验室中进行。按照要求，向洗液1和洗液2中加入分子生物学级别的无水乙醇并及时做好标记，取310μl洗脱液（AVE）溶解310μg/支的Carrier RNA。配置好后，通过传递窗进入核酸提取区或由工作人员送入核酸提取专用实验室。
其次是样本裂解，将560μl AVL裂解液加入1.5ml无菌EP管中，加入5.6μl配制好的Carrier RNA，再加入已经灭活的140μl样本（例如咽拭子、血浆等），混匀振荡15秒，室温静置10分钟，充分裂解样本中的核酸。将EP管瞬时离心后加入560μl无水乙醇，充分混匀15秒，再次瞬时离心后备用。吸取630μl裂解产物，小心加入至离心柱中，8000rpm（或6000g）离心1分钟，转移离心柱至新收集管，将剩余630μl裂解产物加到离心柱中，重复上一离心操作（若样本体积大于140μl，则在此步骤重复将630μl裂解产物过滤收集在一个离心柱上）。
第三步是核酸的洗涤，将500μl洗液1（AW1）加入离心柱中，8000rpm（或6000g）离心1分钟；换新收集管后，取500μl洗液2（AW2）加入离心柱中，8000rpm（或6000g）离心1
分钟；换新收集管后，用rpm（或g）离心3分钟，去除洗液2（AW2）；换新收集管后，继续用离心机最大转速（g）离心1分钟，充分甩离残留的洗液2（AW2）。
哪些省份需要核酸检测最后是核酸的洗脱和回收，将离心柱放入1.5ml无菌EP管中，加入洗脱液（AVE）40~60μl，室温静置1分钟后，用8000rpm离心1分钟回收核酸，以备PCR检测使用。

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