核酸与ELISA检测联合进行血液筛查的结果分析
核酸与ELISA检测联合进行血液筛查的结果分析
目的：分析核酸与ELISA检测联合进行血液筛查的结果。方法：对58827份血液标本用2种ELISA试剂进行筛查，对筛查合格的44725份血液标本进行核酸检测。结果：44725份标本中，核酸检测有15份阳性标本，经确证，15份标本均为HBV DNA阳性，无HCV RNA和HIV RNA阳性标本。结论：核酸与ELISA联合检测可降低输血传播疾病的风险。
[Abstract]Object： To analysis the result of the combination of nucleic acid and ELISA test in blood screening. Methods：Screen 58827 blood specimens with 2 ELISA reagents， and make nucleic acid test on the 44725 blood specimens which passed the blood screening. Results：In the 44725 blood specimens， there are 15 positive specimens. It has been confirmed that the 15 blood specimens are all HBV DNA positive， without HCV and HIV RNA positive. Conclusions：Nucleic acid with ELISA detection can reduce the risk of transfusion transmitted disease.
[Key words]Nucleic acid test；Enzyme linked immunosorbent assay；Blood screening； Blood security
如何保证血液制品的质量以及操作的安全性，防止输血因素导致传染病的感染及爆发一直是社会关注的主要话题内容。因为ELISA检测需要经历较久的“窗口期”，并且病毒的免疫性低、可能出现变异或感染的风险依然存在，所以使得输血的质量及安全应重点关注。核酸检测（NAT）方法属于新型的关于筛查血液病毒的重要检测技术手段，主要选择核酸扩增的科学技术对病原体内部的核酸进行直接性全面性的检测活动。NAT这项方法具备较为灵活的敏感度，能够将标本内部的极为微量的核酸有效地检测出来，并且能够大大降低病毒的监测时间限期的要求，显著优于抗体联合抗原酶联免疫的检测方式。NAT方法能够把HCV、HIV以及HBV受到感染后“窗口期”其平均值降低约25～60天、7～15天以及9～36天，有效缩减了血液输送中发生病毒感染的可能性。中国是在2010年开始执行血液接受核算检测的制度，这表明了国内的输血医学服务步向了新的发展阶段，对今后在输血环节中预防发生病毒感染案例具有较大积极的现实意义。本站从2011年10月开始增加核酸检测，现将核酸与ELISA检测联合进行血液筛查的结果分析报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源
2012至2013年符合GB18467《献血者健康检查要求》的自愿无偿献血者经献血前项目检查合格的血液标本58827份。
1.2 试剂与仪器
ELISA试剂：HBsAg检测试剂盒（厦门新创、北京万泰）；抗-HCV检测试剂盒（北京万泰、意大利索林、ORTHO）；抗-HIV检测试剂盒（北京万泰、法国伯乐）[1]。核酸检测试剂（上海科华生物工程股份有限公司），配套试剂由上海科华公司提供。所有试剂均为经批批检合格试剂，使用前均经本站质管科抽检确认合格，在有效期内严格按照试剂说明书及相关SOP使用[2]。全自动加样系统（瑞士哈美顿STAR）；全自动酶免分析仪（瑞士哈美顿FAME24/20、深圳爱康Uranus AE280）；酶标仪（奥地利Tecan Sunrise）；核酸全自动混样仪（瑞士哈美顿STAR）；实时荧光定量PCR仪（美国ABI 7500）[3]。
1.3 检测方法
1.3.1 ELISA检测 用2种ELISA试剂对当日采集的血液标本进行检测，严格按照SOP进行操作[4]。两种试剂均阳性，则结果为阳性；两种试剂均阴性，则结果为阴性；只有一种试剂为阳性，则用该试剂对标本进行双孔复试，双孔均阳性或只有一孔为阳性，则结果为阳性。
1.3.2 核酸检测 对两种ELISA试剂结果均为阴性的部分标本进一步进行核酸检测：用科华核酸检测系统对标本进行8混样分项目检测，若汇集管阳性，则对该汇集管的8个标本进行单个标本的拆分检测。混样阳性拆分阳性的标本，结果为阳性；混样阳性拆分阴性的标本，结果为阴性。
1.3.3 确证试验 将所有检测所得的结果委托卫计委临检中心进行确证。
2 结果
2.1 ELISA检测
经血液筛查检测后合格标本占91.51%（53834/58827），不合格占8.49%（4993/58827）。见表1。
2.3 确证试验
15份HBV DNA阳性标本送卫计委临检中心确认均为阳性，确证阳性率100%。
3 讨论
NAT方法主要包括以逆转录依赖为基础的扩增方法、PCR法连同别的NAT方法。其中PCR法作为于体外对自然状态下的DNA复制环节进行模拟而形成的核酸扩增技术，本身具备敏感的特异性、灵活的操作方法等优点。NAT方法在检测的样品中发现被漏掉检测的病毒受感染者，有效弥补了ELISA检测的缺陷。我国很多城市和地区的医院自从引进核酸检测技术后也有关于该方面的报道，其主要说明了核酸检测的流程。当前国内有些地方在检测时选择单个标本或者多种标本进行混搭的方式进行检测。欧美很多的国家及地区选择NAT方法作为血液筛查主要的方式进行相应的研究，其目的主要是基于对HCV及HIV探究的目的。在国内逐渐出现HBV流行向着更严重的方向发展的现象，对献血者进行专门的筛查其目的在于避免HBV发生漏检。目前我国已经有实践研究表明，通过在血液筛查活动中选择NAT方法作为主要的检测方法，有助于保证输血的质量及安全性。目前输血安全面对的不利影响因素是在筛查阶段病毒潜伏的“窗口期”，它指的是人体感染HIV后到外周血液中能够检测出HIV抗体的这段时间，通常是2周至3个月，少数人可达到4个月甚至5个月，较少会大于超过6个月，目前关于“窗口期”国际公认的为6个月，但随着检测技术以及手段的不断进步，窗口期已明显缩短。
本站5项输血相关传染病指标不合格率为8.49%，高于九江市（3.52%）和成都市（4.82%）；ALT不合格率达到63.13%，远高于其他地区。提示应对血液采集前的ALT检测
进行严格的培训及质量控制，减少不必要的血液资源浪费。
44725份ELISA检测阴性的标本中，核酸检出15份阳性标本，核酸检测阳性率为0.034%，与成都市基本一致（0.035），低于九江市（0.19%）和郑州市（0.081%）；汇集管的有效拆分率为37.5%，低于成都市（48.38%）和郑州市（53%）。这可能与实验室核酸污染有一定关系，提示应加强核酸检测实验室管理，避免因扩增产物、人为操作等因素造成的假阳性[5]。
44725份标本共检出15份HBV DNA阳性标本，无HCV RNA和HIV RNA阳性标本。分析原因：①RNA病毒容易降解，血液标本在采集后应立即分离，标本保存与运输应控制在要求的温度范围内；②我国属乙肝高流行地区；③核酸检测标本量不够大。目前，本站核酸标本检测率为76%（44725/58827），应加大核酸检测力度，同时加强从标本采集到核酸检测每一个步骤的质量控制工作。
近年来随着生物医学和检验技术的发展，输血的安全性有了很大的改善，但经输血传播病毒性疾病残余风险度依然很高[6]。应用核酸检测技术进行血液病毒核酸筛查具有高灵敏度和高特异性、能显著缩短病原体检出窗口期、能检出因隐匿性HBV感染、免疫静默感染、免疫亚
型和变异导致的ELISA漏检。因此，将核酸检测技术应用于血液筛查十分必要[7]。
参考文献手机上怎么查核酸检测结果
[1]陈红，王亚彬，倪龙凤，等.核酸与ELISA检测联合应用于血液筛查的结果分析[J].中国输血杂志，2014，27（8）：847-848.
[2]刘胡敏，陶传敏，高加良，等.ELISA结合核酸检测技术对献血者作血液筛查结果分析[J].中国输血杂志，2013，26（5）：456-458.
[3]赵红娜，王艺芳，葛文超，等.郑州地区无偿献血者中核酸检测的初步应用[J].中国输血杂志，2014，27（9）：923-926.
[4]季茂胜，高美君，赵欣，等.成都市136531名无偿献血者血液标本检测结果分析[J].临床输血与检验，2013，2（3）：31-32.
[5]何亚琴，张建伟，杨爱龙，濮云峰，庄华.核酸检测技术在常州地区献血筛查中的应用[J].中国输血杂志，2011，7（7）：24-25.
[6]李之烨，焦东丽.太原市2005—2011年无偿献血者血液检测结果分析[J].中国输血杂志，2013，12（4）：321-322.
[7]王健，刘玉莲.昌吉地区2009—2011年无偿献血者血液检测结果分析[J].实验与检验医学，2013，4（2）：151-152.

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