(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书 | ||
| 棉花事件 | (10)申请公布号 CN 1551920 A (43)申请公布日 2004.12.01 | |
(21)申请号 CN02817381.3
(22)申请日 2002.07.19
(71)申请人 拜尔生物科学公司
地址 比利时根特
(72)发明人 L·特落林德尔 J·格温 M·德博克勒尔
(74)专利代理机构 北京市中咨律师事务所
代理人 黄革生
(51)Int.CI
C12N15/29
C12N15/82
C12Q1/68
A01H5/00
A01H5/10
权利要求说明书 说明书 幅图 |
(54)发明名称
除草剂抗性的棉花植物及生产和鉴定其的方法 | |
(57)摘要
本发明涉及转基因棉花植物、植物材料和种子，其特征在于：在棉花基因组的特定位置包含特定转化事件，特别是存在编码赋予除草剂抗性的蛋白质的基因。本发明的棉花植物将除草剂抗性表型和最佳农艺性状结合在一起。 | |
法律状态
法律状态公告日 | 法律状态信息 | 法律状态 |
2022-08-05 | 专利权有效期届满IPC(主分类):C12N15/29专利号:ZL028173813申请日:20020719授权公告日:20090805 | 专利权的终止 |
权 利 要 求 说 明 书
<Claim>1、在基因组中包含事件EE-GH1的转基因棉花植物或其种子、细胞或组织。
<Claim>2、如权利要求1所述的转基因棉花植物或其种子、细胞或组织，当利用分别包含SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3的核苷酸序列的两个引物，采用EE-GH1原种事件鉴定方法进行分析时，其基因组DNA产生250至290bp的DNA片段。
<Claim>3、如权利要求2所述的棉花植物或其种子、细胞或组织，其中所述DNA片段是约269bp的片段。
<Claim>4、通过对生长自保藏在ATCC、保藏号为PTA-3343的种子的棉花植物进行繁殖和/或育种所获得的棉花植物或其种子、细胞或组织。
<Claim>5、作为保藏在ATCC、保藏号PTA-3343的种子的子代的棉花植物、其种子、细胞或组织。
<Claim>6、鉴定生物样品中原种事件EE-GH1的方法，该方法包括：用特异识别SEQ ID NO：3中EE-GH1的5’侧翼区或SEQ ID NO：4中EE-GH1的3’侧翼区的引物或探针检测EE-GH1特异区。
<Claim>7、如权利要求6所述的方法，所述方法包括利用聚合酶链式反应，用至少两个引物从所述生物样品中存在的核酸扩增100至350bp的DNA片段，其中一个引物识别EE-GH1的5’或3’侧翼区，另一个引物识别EE-GH1的外源DNA内的序列。
<Claim>8、如权利要求7所述的方法，其中所述一个引物识别SEQ ID NO：3的5’侧翼区内的序列，而所述另一引物识别EE-GH1的外源DNA内的序列。
<Claim>9、如权利要求8所述的方法，其中所述识别EE-GH1的5’侧翼区内序列的引物包含SEQ ID NO：2的序列。
<Claim>10、如权利要求6到9任一项所述的方法，其中所述识别外源DNA内序列的引物包含SEQ ID NO：1的序列。
<Claim>11、鉴定生物样品中EE-GH1的方法，该方法包括用在严格条件下能与SEQ ID NO：3中EE-GH1的5’侧翼序列或SEQ ID NO：4中EE-GH1的3’侧翼序列内的序列杂交的特异引物或探针检测EE-GH1特异区。
<Claim>12、鉴定包含原种事件EE-GH1的转基因植物或其细胞或组织的方法，该方法包括根据PCR鉴定法，利用两个分别具有SEQ ID NO：1和SEQID NO：2的核苷酸序列的引物进行聚合酶链式反应来确定基因组DNA是否可以用于扩增250至290bp的DNA片段。
<Claim>13、鉴定生物样品中原种事件EE-GH1的试剂盒，所述试剂盒包含至少一个PCR引物或探针，所述PCR引物或探针识别SEQ ID NO：3中EE-GH1的5’侧翼区内序列或SEQ ID NO：4中EE-GH1的3’侧翼区内序列。
<Claim>14、如权利要求13所述的试剂盒，其中所述至少一个PCR引物识别SEQ ID NO：3中植物DNA内的序列。
<Claim>15、如权利要求14所述的试剂盒，其中所述识别SEQ ID NO：3中植物DNA内的序列的引物包含S
EQ ID NO：2的序列。
<Claim>16、如权利要求13到15所述的试剂盒，其还包含识别EE-GH1的外源DNA内序列的至少第二PCR引物或探针。
<Claim>17、如权利要求16所述的试剂盒，其中所述识别EE-GH1的外源DNA内序列的引物包含SEQ ID NO：1的序列。
<Claim>18、验证种子纯度的方法，该方法包括：在种子样品中，用特异识别SEQ ID NO：3中EE-GH1的5’侧翼区内序列或SEQ ID NO：4中EE-GH1的3’侧翼区内序列的特异性引物或探针检测EE-GH1特异的DNA序列。
<Claim>19、筛选存在EE-GH1的种子的方法，该方法包括：在种批样品中，用特异识别SEQ ID NO：3中EE-GH1的5’侧翼区内序列或SEQ ID NO：4中EE-GH1的3’侧翼区内序列的特异性引物或探针检测EE-GH1特异的DNA序列。
<Claim>20、保藏在ATCC、保藏号为PTA-3343的种子。
<Claim>21、包含原种事件EE-GH1的棉花种子，保藏在ATCC、保藏号为PTA-3343并包含所述事件的标准种子。
<Claim>22、来源于权利要求21的种子并包含原种事件EE-GH1的棉花植物、其细胞或组织或植物材料。
<Claim>23、转基因棉花植物、种子、细胞或组织，其基因组DNA包含在含有至少40bp如下序列的区域整合进入染体DNA的转基因，所述序列在严格条件下能与SEQ ID NO：5的序列的互补序列杂交。
<Claim>24、生产转基因棉花植物或棉花植物的细胞或组织的方法，所述方法包括：向对应于至少40bp如下序列的棉花染体DNA区域中引入重组DNA分子，其中所述序列在严格条件下能与SEQ ID NO：5的序列的互补序列杂交；和，任选地，从转化的棉花细胞或组织再生棉花植物。
<Claim>25、如权利要求24所述的方法，其中所述重组DNA分子包含除草剂抗性基因。
<Claim>26、通过权利要求24或25所述的方法获得的棉花植物或其细胞或组织。
<Claim>27、转基因棉花植物或其种子、细胞或组织，其
i)在基因组中包含事件EE-GH1；或
ii)包含事件EE-GH1，但前提是用在事件中的bar基因被在严格条件下能与bar基因的互补序列杂交的核酸序列置换。
<Claim>28、可以利用一套引物从棉花核酸样品扩增的DNA分子，其中第一引物包含与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：4内序列互补的15到30个核苷酸的序列，第二引物包含与所述玉米核酸样品中存在的外源DNA互补的序列。
<Claim>29、如权利要求28所述的DNA分子，其可以利用一套引物从棉花核酸样品扩增产生，其中第一引物包含SEQ ID NO：2，第二引物包含SEQ IDNO：3。
<Claim>30、包含权利要求28或29的DNA的检测试剂盒。
<Claim>31、从玉米组织分离的DNA分子，其包含SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：4的序列。
<Claim>32、一种DNA分子，其包含与如下序列相同或互补的序列，该序列具有位于SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：4中所含插入位点的两侧并与所述插入位点邻近的植物DNA和外源DNA的9个核苷酸。
说 明 书
<U>技术领域</U>
本发明涉及转基因棉花植物，植物材料和种子，其特征在于：在棉花基因组的特定位置包含特定的转化事件，特别是存在编码赋予除草剂抗性的蛋白质的基因。本发明的棉花植物将除草剂抗性表型和在缺乏杂草压力的情况下等同于非转化棉花株系的农艺性状、遗传稳定性和对不同遗传背景的适应性结合在一起。
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