牛初乳sIgA等电点的测定
《乳业科学与技术》２００８年第３期（总第１３０期）
千里戈壁牛初乳中ｓＩｇＡ是纯天然功能因子，在黏膜免疫方面具有很高的医学价值［１］。研究表明牛初乳ｓＩｇＡ与人初乳ｓＩｇＡ具有相同的免疫源性［２］，目前新西兰、澳大利亚等国已将牛初乳ｓＩｇＡ添加到婴幼儿食品及保健品中，实现婴幼儿奶粉“母乳化”的目标。如澳大利亚的澳优奶粉首先在奶粉中添加了牛初乳ｓＩｇＡ，成为全球首款营养免疫配方奶粉和全球首款营养免疫强化配方奶粉。新西兰推出的亨氏奶粉也添加了ｓＩｇＡ，这类奶粉得到众多家长的推崇。目前，牛初乳ｓＩｇＡ的提取技术在国内尚属空白，本实验室欲采用离子交换层析的方法纯化牛初乳ｓＩｇＡ，其中确定ｓＩｇＡ的等电点是一个关键性技术问题。本实验采用等电聚焦电泳法（ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｆｏｃｕｓｉｎｇ，ＩＥＦ）来测定ｓＩｇＡ的等电点。
１材料与方法
１．１仪器与试剂
仪器：超滤器（ＰＡＬＬ公司）；ＬＣ－１０ＡＴｖｐ高效液相谱仪（岛津公司）；Ｎ３０００谱工作站（浙江大学）；电泳槽（北京市六一仪器厂）；稳压稳流电泳仪（北京市六一仪器厂）；ＰＢ－２０标准型ｐＨ计（北京赛多利斯仪器系统有限公司）
试剂：ｓＩｇＡ标准品（Ｓｉｇｍａ公司）；超滤膜包（ＰＡＬＬ公司）；ＴＳＫ－Ｇ３０００ＰＷｘｌ凝胶谱柱（ＴＯＳＯＨ公司）；载体两性电解质ｐＨ３．０－９．５（中国军事医学科学院）
原料：牛初乳（由哈尔滨康普乳品有限公司提供）１．２牛初乳的预处理
量取新鲜牛初乳离心除脂肪，得到的脱脂乳调ｐＨ值至４．６，离心除酪蛋白，收集乳清。然后调ｐＨ值至６．８，加硫酸铵至饱和度达到３３％，离心收集沉淀。用生理盐水溶解沉淀并不同倍数稀释，进行超滤，收集回流液，经ＨＰＬＣ检测，选定最佳稀释倍数的超滤回流液作为等电聚焦电泳的上样样品。
牛初乳ｓＩｇＡ等电点的测定
刘晓飞１，高学军１＊，李春１，姚永豪２，周盛华３
教师节国旗下讲话（１东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨１５００３０；２哈尔滨康普乳品有限公司；
３东北农业大学动物医学学院）
摘要：采用等电聚焦电泳法测定牛初乳ｓＩｇＡ的等电点。牛初乳ｓＩｇＡ的ｐＩ为５．０２－５．
６７，比相关报道更加精确。回归方程：ｙ＝０．７５４３ｘ＋３．１６３５，相关系数ｒ＝０．９９８９，表明线性关系良好，为牛初乳ｓＩｇＡ的离子交换层析制备条件的选择提供了可靠的理论依据。
关键词：牛初乳；ｓＩｇＡ；等电点
中图分类号：Ｑ５１１文献标识码：Ａ文章编号：１６７１－５１８７（２００８）０３－０１１５－０２
ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＩｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃＰｏｉｎｔｏｆＢｏｖｉｎｅＣｏｌｏｓｔｒｕｍｓＩｇＡ
ＬｉｕＸｉａｏｆｅｉ１，ＧａｏＸｕｅｊｕｎ１＊，ＬｉＣｈｕｎ１，ＹａｏＹｏｎｇｈａｏ２，ＺｈｏｕＳｈｅｎｇｈｕａ３（１ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＨａｒｂｉｎｏｆＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ１５００３０，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ；２ＨａｒｂｉｎＫａｎｐｕｒｅＤａｉｒｙＬｉｍｉｔｅｄＣｏｍｐａｎｙ；
３ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙｃｏｌｌｅｇｅｏｆＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＩｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｐｏｉｎｔｏｆｂｏｖｉｎｅｃｏｌｏｓｔｒｕｍｓｓＩｇＡｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｆｏｃｕｓｉｎｇｉｎｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ａｎｄａｎＩＥＦｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．ＩｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｐｏｉｎｔｏｆｂｏｖｉｎｅｃｏｌｏｓｔｒｕｍｓｓＩｇＡｉｓ５．０２－５．６７，ｔｈｉｓｒｅｓｕｌｔｉｓｐｒｅｃｉｓｅｒｔｈａｎｔｈｅｒｅｌａｔｅｄｒｅｐｏｒｔ．Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎ：ｙ＝０．７５４３ｘ＋３．１６３５，ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ：ｒ＝０．９９８９，ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｈａｄａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ．ＴｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔｏｆｆｅｒｓａｒｅｌｉａｂｌｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆｏｒｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｂｏｖｉｎｅｃｏｌｏｓｔｒｕｍｓｓＩｇＡ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂｏｖｉｎｅｃｏｌｏｓｔｒｕｍ；ｓＩｇＡ；ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｐｉｏｎｔ
测量学实习报告
收稿日期：２００８－０１－２１；
作者简介：刘晓飞，女，硕士研究生，主要从事蛋白质分离纯化的
研究；＊通讯作者：高学军，男，博士生导师；
二月再见三月你好正能量句子
基金项目：黑龙江省科技厅（ＧＡ０６Ｂ２０１－４）项目资助。
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１．３等电聚焦电泳
等电聚焦电泳操作［３］。
２结果与分析
乳清盐析沉淀得到的免疫球蛋白，经不同倍数稀释后超滤，ＨＰＬＣ检测９００倍稀释后超滤的回流液中主峰的保留时间是９．２４９ｍｉｎ，与牛初乳ｓＩｇＡ标准品的保留时间一致（见图１），且纯度达到８９．４％，见图２。
图１ｓＩｇＡ标准品的ＨＰＬＣ检测
图２样品９００倍稀释后超滤回流液经ＨＰＬＣ检测
使用９００倍稀释后超滤的回流液作为样品，进行等电聚焦电泳的上样样品，结果见图３。
图３牛初乳ｓＩｇＡ的等电聚焦电泳图
火炬之光2 控制台 套装
泳道１：样品９００倍稀释后超滤回流液；泳道２：ｓＩｇＡ标准品
图４等点聚焦电泳法测定ｐＨ值梯度曲线
如图３所示，泳道１和２中均可以看到明显的三个条带，并且对应性很好。
以凝胶距正极的距离为横坐标，各段胶ｐＨ平均值为纵坐标绘制曲线，见图４。回归方程为：ｙ＝０．７５４３ｘ＋３．１６３５，Ｒ２＝０．９９７８，表明凝胶各段的ｐＨ平均值与其距离正极的长度之间存在良好的线性关系。
计算出牛初乳ｓＩｇＡ聚焦部位距凝胶正极的实际长度，在梯度ｐＨ曲线上查得：牛初乳ｓＩｇＡ的等电点为５．０２－５．６７。
３结论
经等电聚焦电泳法测定牛初乳ｓＩｇＡ的ｐＩ为５．０２－５．６７，与傅骁勇［４］报道的结果４．５－６．８相符，并且测定结果范围更小，更精密，为精细纯化牛初乳ｓＩｇＡ提供了可靠的依据。证明等电聚焦电泳法能够准确的测定牛初乳ｓＩｇＡ的等电点，方法简便易行。
参考文献
［１］ＢｌａｉｓｅＣｏｒｔｈéｓｙ．ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＡ：ｐｏｗｅｒｆｕｌｔｏｏｌｓｆｏｒｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌａｎｄａｐｐｌｉｅｄｒｅｓｅａｒｃｈ［Ｊ］．ＴｒｅｎｄｓｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００２，２０（２）：６５－７１．
［２］ＫｌｉｎｇｍｕｌｌｅｒＤ，ＨｉｌｓｃｈｍａｎｎＮ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｒｅｅｓｅｃｒｅｔｏｒｙｐｉｅｃｅｏｆｈｕｍａｎｃｏｌｏｓｔｒｕｍ［Ｊ］．ＨｏｐｐｅＳｅｙｌｅｒｓＺＰｈｙｓｉｏｌＣｈｅｍ．，１９７９，３６０（１２）：１８９５－９０２．
［３］郭尧君．蛋白质电泳实验技术［Ｍ］．科学出版社，１９９９，２：１７５－１８１．［４］傅骁勇，谭璐，徐敬．牛初乳免疫球蛋白Ａ的纯化与原子力显微镜观测［Ｊ］．第二军医大学学报，２００４，２５（１）：１０８－１０９．
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刘晓飞等：牛初乳ｓＩｇＡ等电点的测定１１６

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