酵母核糖核酸的分离及组分鉴定预习报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定预习报告
一、实验目的
1.学习核酸提取，并掌握鉴定核酸组分的方法。
二、实验原理
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。
手机查核酸报告查询三、实验用品
1.器材：乳钵、150ml锥形瓶、恒温水浴锅、量筒、布氏漏斗、抽滤瓶、吸管、滴管、试管、试管架、烧杯、离心机、漏斗。
2.药品：
⑴0.04mol/L氢氧化钠溶液
⑵酸性乙醇溶液500ml，将0.3ml浓盐酸加入30ml乙醇中。
⑶95%乙醇
⑷乙醚
⑸1.5mol/L硫酸溶液                                             
⑹浓氨水                                                         
⑺0.1mol/L硝酸银溶液                                         
⑻三氯化铁浓盐酸溶液80ml，将2ml 10%三氯化铁溶液(用FeCl·6H20配制 )加入到400ml浓盐酸中。
⑼苔黑酚乙醇溶液10ml  溶解6g苔黑酚于100ml 95%乙醇中(可在冰箱中保存1个月)。
⑽定磷试剂                                                     
①17%硫酸溶液  将17ml浓硫酸(比重1.84)缓缓加入到83ml水中。
②2.5%钼酸铵溶液  将2.5g钼酸铵溶于100ml水中。
③10%抗坏血酸溶液  10g抗坏血酸溶于100ml水中，贮棕瓶保存。溶液呈淡黄时可用，如呈深黄或棕则失效，需纯化抗坏血酸。
临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。
17%硫酸溶液：2.5%钼酸铵溶液：10%抗坏血酸溶液: 水=1:1:1:2 (V／V)混合既是定磷试剂。
3.材料：酵母粉。                                                         
四、实验方法
将15g酵母悬浮于90ml 0.04mol/L，氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150ml锥形瓶中。在沸水浴上加热30min后，冷却。离心(3000r/min)15 min，将上清液缓缓倾入30ml酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离
心(3000r/min)3min。弃去清液。用95%乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。
取200mg提取的核酸，加入1.5mol/L硫酸溶掖10mL,在沸水浴中加热10 min制成水解液并进行组分的鉴定。
1.嘌呤碱  取水解液lml加入过量浓氨水，然后加入约1ml 0.1mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。
2.核糖  取1支试管加入水解液1ml、三氯化铁浓盐酸溶液2ml和苔黑酚乙醇溶液0.2ml。放沸水浴中10min。注意溶液是否变成绿，说明核糖的存在。
3.磷酸  取1支试管，加入水解液1ml和定磷试剂1ml。在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝，说明磷酸是否存在。

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