槐米中芦丁的提取结晶与含量测定
李 慧 王明明 延安大学附属医院药剂科(延安716000)
摘 要 目的：探讨制备高纯度的芦丁方法。方法：采用酸提碱沉法从槐米中提取芦丁，并经过精制分离得芦丁对照品，用化学法、薄层层析法、核磁共振法进行鉴定，高效液相谱法测定其
含量。结果：经以上三种方法鉴定表明芦丁样品与标准品基本一致，高液相测得含量98.
06%。结论：此种实验室制备芦丁对照品的方法操作简单易行，产品纯度较高可作为对照
品代替标准品用。
主题词 中药/标准 槐花/分析 槐花/化学 质量标准
【中图分类号】 R282.5 【文献标识码】 A 【文章编号】 1000-7369(2011)10-1412-02
芦丁，亦称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现的含芦丁的植物有50种以上，其中以槐米和荞麦叶中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁属于黄酮类化合物，在心脑血管疾病的上起到了举足轻重的作用，具有V P样作用。有助于保持毛细血管正常弹性，同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作
用。其临床效果肯定，副作用少，同时也是一种植物原料药[1]。本实验拟探究一种实验室制备高纯度芦丁的方法，用作对照品或满足其他特殊需要的试剂。
1 材料与仪器 1.1 试 剂 芦丁标准品(中国药品生物制品鉴定所)，甲醇为谱醇，其它试剂均为分析纯，水为重蒸水。芦丁购于延大医附院药房经鉴定无误。
1.2 仪 器 日本岛津高效液相谱仪(LC10A Tvp溶剂输送泵,S PD10Av p紫外可见检测器,CTO10Asp柱温箱),HW2000谱工作站(南京千谱软件公司)。电子分析天平(型号BS124S),JB202-电热恒温干燥箱(上海金忠科学仪器有限公司制造), DL-360超声波清洗皿(浙江象山县石浦海天电子仪器厂),T GL-16台式高速离心机(上海冠戈实业有限公司制造)，紫外分光光度计(2401PC-日本岛津)。
2 实验方法与结果
2.1 芦丁的提取精制 采用酸提碱沉法[2]：称取槐米粉，置500m L烧杯中，加沸水、硼砂搅拌，于石棉网上加热至微沸，然后加入适量饱和石灰水溶液，保持pH8～9之间，并不断地搅拌，微沸30min后，过滤，滤液收集。以同法再次收集滤液并合并，待滤液温度降至60～70℃之间时用浓盐酸调pH4～5之间，当温度降至室温时放入冰箱静置12h，使沉淀完全，抽滤，沉淀，用蒸馏水洗至中性，干燥得粗品芦丁，蒸馏水重结晶，得精制芦丁。
2.2 芦丁的纯化 用葡聚糖凝胶柱进一步分离纯化，称取精制芦丁0.25g，用少量甲醇使之溶解，加入葡聚糖凝胶柱顶，用甲醇洗脱，试管收集,15m L/管，共收集22管，用聚酰胺膜鉴定芦丁并作如下合并收集液。第1瓶1～10管，第2瓶11～22管；然后水浴浓缩至原液的一半，冷置，仅第一瓶出现黄绿微细针状结晶，再继续浓缩,60℃干燥即得芦丁纯品。
快男欧豪女朋友图片2.3 芦丁的鉴定
2.3.1 化学法鉴定 本品为黄结晶粉末，熔程为188～190℃(梯勒熔点管法)，盐酸镁粉反应呈阳性；氨性氯化锶反应呈阳性显示有邻二酚羟基；锆盐枸橼酸反应呈阳性显示有3及5-羟基存在。水解液用薄层层析鉴定，显示有葡萄糖及鼠李糖存在。
2.3.2 薄层层析鉴定 用3cm×5cm的聚酰胺膜，选3种展开剂：分别为A，丙酮∶水(3∶1);B，氯仿∶甲醇(5∶4);C，醋酸乙酯∶甲酸∶水(8∶1∶1)。氨熏后喷显剂3%的三氯化铝显，经重结晶的芦丁样品在上述3种展开剂中均只显一个斑点。
2.3.3 氢核磁共振法鉴定 芦丁样品与芦丁标准品图一致。
2.4 芦丁含量测定(HPLC法)[3]
2.4.1 谱条件 流动相为甲醇4.3%乙酸(55∶45)，应用前经混合纤维素酯微孔滤膜过滤，超声脱气，
流速为 1.0m L/min，进样量为20μl，检测波长为254nm，芦丁的出峰时间为3～4min，该谱条件下对照品及样品的谱一致。
2.4.2 最大波长的选择 配置芦丁标准品溶液浓度为0.002.04m g/m L在紫外分光光度计中扫描，结果显示最大吸收波长有214、254、360nm，由于在214nm处干扰因素多，因此高效液相选择在254nm 处测定。
2.4.3 供试品溶液的配制 精密称取经变硅胶干燥的芦丁标准品0.01005g，芦丁样品1号(为经
含反义词的成语有什么过葡聚糖凝胶柱分离的)0.01005g，芦丁样品2号(未经葡聚糖凝胶柱分离的)0.01002g，分别置于50 m L容量瓶内，用甲醇定容，在超声清洗皿中超声3 min，使之全部溶解，然后在分别倒少量入EP管中离心10min,12000r/min。得芦丁标准品溶液浓度为0. 201mg/m L，芦样1号浓度为0.2001m g/m L，芦样2号浓度为0.2004mg/m L。
2.4.4 标准曲线的制备 芦丁标准品溶液的浓度为0.2001mg/m L，将其稀释成1,1/2,1/4,1/16,1/ 64,1/256系列浓度，编号为1,2,3,4,5,6，吸取20μl 进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线如下，进行线性回归处理，求出回归方程:Y=4E+ 07X-2660.2,r=0.9996，浓度单位是mg/m L，峰面积的范围在228710.5μV·s～7494036.5μV·s 内[4]。结果表明芦丁的浓度在0.00628125～0.201 m g/m L范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。半夏微凉
2.4.5 样品的含量测定 将配制好的芦丁样品1号,2号进样，测得峰面积，然后代入标准曲线得浓度。测得样品的含量为98.05%。
论语全文及译文2.4.6 加样回收实验 分别取3份已知浓度的样品1号溶液0.8m L放入EP管中，在分别加标准品溶液0.1,0.2,0.3m L，甲醇0.2,0.1,0m L，定于 1.1 m L，离心10min,12000r/min，结果见附表。
附表 回收率测定结果
样品量mg加入量mg测定量回收率%平均%RSD%
爱情麻辣烫高圆圆10.054212.000022.1924101.3745
10.035512.000022.0605100.2491
10.039612.000022.1089100.6903101.420.98
10.030112.000022.2412102.1047
10.041112.000022.3089102.6670
2.4.7 芦丁样品精密度实验 精密量取芦丁样品1号溶液1m L放入EP管中，离心10min,12000 r/min.
供试品5次测量结果RSD%为0.33，小于2. 0%，说明本试验的精密度较好。
2.4.8 芦丁样品重现性实验 精密量取芦丁样品1号溶液0.8m L于EP管中，在加0.2m L甲醇，分别做5份，离心10min,12000r/min。RSD%0.44，小于 2.0%，说明本实验的重现性较好。
3 讨 论 用酸提碱沉法提取芦丁具有工艺简单、效率高和较经济等优点，采用高效液相法测定芦丁的含量，该法使用的试剂常见，方法精确、灵敏、线性范围宽，稳定性和重现性均能满足要求[5]。测得芦丁的含量为98.05%，可以代替对照品测定物质的含量和满足其它特殊需要的试剂。
在芦丁的提取工艺中，由于用的是酸提碱沉法，所以加入的石灰水的量和浓盐酸的量是本试验的关键，当pH为10时，产品质量为1.5g，当p H为9时，产品质量为 2.3g，当p H为8时，产品质量为 1.97g，当pH为7时，产品质量为1.10g。
葡聚糖凝胶对分离黄酮类化合物效果很好，此方法即简便，又适合实验室操作。实验产品纯度高，含量达98.05%，可代替芦丁标准品测定芦丁制剂中的芦丁含量。
实验中笔者发现芦丁极易被氧化变，要注意避光干燥保存。选择沸水溶液提取以破坏酶，而且在槐米中果胶和粘液质较多。提取液通常因含有大量粘稠的杂质而难以过滤，所以本文直接用水加石灰乳提取芦丁，方法更加有效，但应注意加硼砂以保护临二酚羟基，而且整个过程对酸度控制要求较高。
柱温对含量测定的影响较小，随着柱温的增加，保留时间有所缩短，峰的扩散有所改善，但对含量测定影响较小。
参考文献
[1] 杨德全，叶建阳，刘鸿云，等.从苦荞麦中提取芦丁的研究[J].延安大学学报(自然科学版),1997,16(4):67.
[2] 宋延生.天然防晒剂-芦丁[J].日用化学工业杂志, 1991,5:47.
[3] 刘
林，孙曾培.苦荞麦疗效粉中芦丁的含量测定[J].药物分析杂志,1991,11(1):49.
[4] 胥秀英.高效液相谱法测定大枣中芦丁的含量[J].食品科学,2004,25(4)147-149.
[5] 何铭清.中草药有效成分理化与药理特性[M].长沙：湖南科学技术出版社,1979:2031.
(收稿2011-05-13；修回2011-07-15)
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