康乃馨植物组织培养
《植物组培快繁技术》
康乃馨植物组织培养
实
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设
计
小组成员：陈梅20141641044
郑莉20141641002
彭于晏 郭采洁 电影雷雨田20141641043
康乃馨植物组织培养
网王小说一、实验目的
掌握植物离体快速繁育原理、方法和完整过程。
二、实验原理大虾的做法大全家常菜
香石竹（学名Dianthuscaryophyllus）又名康乃馨，花艳丽，开花时间长，装饰效果好，是世界上最畅销的切花之一，具有较高经济价值。由于病毒病侵害，常使植株矮化，花朵变小，花产生斑点，退甚至不开花，影响切花产量和质量。通过茎尖分生组织培养，能够获得“无病毒”的健康植株，对于引进的少而新的脱毒种苗，再进行一次茎尖培养，进一步降低基础苗中的病毒含量，并通过组织培养的方法快速繁殖，在短期内，就可以获得大量的脱毒试管苗，使引入材料迅速在生产上推广应用，取得明显的经济效益。
三、实验仪器与材料
仪器：超净工作台、酒精灯、电炉、烧杯、玻璃棒、镊子、解剖刀、接种盘、纱布、记号笔、标签纸
试剂：75%乙醇、0.1%、无菌水、MS培养基、IAA0.1mg/L、BA0.5mg/L、pH5.8-6.0、蔗糖、琼脂
材料：康乃馨带芽外植体材料
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四、实验步骤
（一）培养基的配方
1、康乃馨的生芽培养基
MS+IAA(0.1mg/L)+BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+琼脂(8g/L)
pH5.8-6.0，配制300ml，用培养瓶分装10~15瓶。另外需要制备无菌水10瓶，培养
瓶每人3~4瓶。纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。
2、康乃馨的继代培养基
MS+BA(0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+琼脂(8g/L)，pH5.8-6.0，配制
300ml，用培养瓶分装10-15瓶。另外需要制备无菌水10瓶，培养瓶每人3-4瓶。纱布、碟子若干后二者分别用报纸包好一同灭菌。
3、康乃馨的生根培养基
MS+生根培养基为1/2MS+NAA(0.075mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(8g/L)，
pH5.8-6.0，配制0.3L，用培养瓶分装10-15瓶。另外，需要制备无菌水10瓶，每人3-4培养瓶、纱布、碟子若干后二者分别用报纸包好一同灭菌。
（二）康乃馨的生芽培养
1、无菌操作准备
将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯照射消毒20-30min，开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手、换鞋，换实验服，戴口罩，进入接种室，开启超净工作台。用纱布吸取75%酒精擦手、擦拭超净台、擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具放入灭菌锅灭菌，待冷却后使用。
2、外植体消毒
选取康乃馨叶腋间生出的侧芽为外殖体，用自来水冲洗半小时，将材料上的泥土和灰尘及杂质冲洗干净，用解剖刀切取所需组织放入大烧杯中，用75%的酒精浸泡消毒30s，用无菌水冲洗3次，再将材料移入0.1%溶液浸泡10分钟，然后在超净台内用无菌水冲洗6次。材料消毒完成。
3、外植体的制备
将消毒好的材料用无菌滤纸吸去多余的水份，然后在无菌超净工作台上的接
种盘内，借助解剖刀剥离茎尖，剥取茎尖大小通常在0.3mm左右。以上操作均需在酒精灯火焰旁进行。
4、外殖体接种
用灭菌过的镊子将切好的外植体接种到配置好的接种培养基上，每瓶接2-3块，每人至少三瓶，可以更多一些。接种培养基为
MS+IAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L,PH5.8，蔗糖3%，琼脂0.75%。接种完成后盖上瓶盖。贴标签，注明材料名称、接种日期和姓名。
5、培养与观察
将培养瓶表面用酒精擦拭消毒置于培养室培养。整理、清洁超净工作台。康乃馨的培养条件为温度25±1℃，一昼夜光照16h，光照强度2000lx。经过10天左右的培养，大部分茎尖开始萌动，逐渐长大,20天左右即可长成一小丛植株。定期观察培养情况：包括观察日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。（三）康乃馨的继代培养
1、无菌操作准备
将培养基及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯照射消毒20-30min，开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手、换鞋、换实验服，戴口罩，进入接种室，开启超净工作台，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯。镊子、解剖刀、剪刀等接种工具放入灭菌锅灭菌，待冷却后使用。
2、无菌操作接种
酒精灯火焰旁打开康乃馨芽苗培养基，用镊子取出康乃馨芽苗，置于无菌接种盘内，用解剖刀将芽苗簇切割成含2~3芽苗然后切去芽苗的上端。
3、培养
用灭菌过的镊子将切好的外植体接种到配置好的接种培养基上，每瓶接2-3块，每人至少三瓶，可以更
多一些。将培养瓶表面用酒精擦拭消毒置于培养室进行光照培养。整理、清洁超净工作台。
4、观察记录
定期观察培养情况：包括观察日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。
（四）康乃馨芽苗的诱导生根
1、无菌操作准备
将培养基及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯照射消毒20-30min，开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手、换鞋、换实验服，戴口罩，进入接种室，开启超净工作台，用纱布吸取75%酒精擦手，擦拭超净台，擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯。镊子、解剖刀、剪刀等接种工具放入灭菌锅灭菌，待冷却后使用。
企业性质有哪些2、无菌操作接种
酒精灯火焰旁打开康乃馨培养瓶，用镊子取出康乃馨芽苗置于无菌接种盘，用解剖刀将芽苗的每个小芽分开。用镊子将单个小芽插入生根培养基，每瓶接3个。盖上瓶盖，贴上标签，注明材料名称、接种日期和姓名。
3、培养
将培养瓶表面用酒精擦拭消毒置于培养室进行黑暗培养。整理、清洁超净工作台。
4、观察记录
定期观察培养情况：包括观察日期、生长情况、以及污染情况等，并做好记录。

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