微生物常见生化培养基
硝酸盐培养基
硝酸钾0.2g
蛋白5g
蒸馏水1000ml
PH 7.4
制法:溶解,校正PH,分装试管,每管约5ml,121℃高压灭菌15min。
硝酸盐还原试剂
甲液:将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
乙液:将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
试验方法
接种后在36±1℃培养1~4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红。
注:本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红。
氧化酶
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干燥冰箱内避光保存。
1%α—萘酚—乙醇溶液。
试验方法
取白洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红,并逐渐加深;再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝。阴性于两分钟内不变。
以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显反应与以上相同。
淀粉水解(生化试验培养基,用于产乳酸的链球箘的鉴定)
蛋白胨10g
NaCl 5g
牛肉膏5g
可溶性淀粉2g
蒸馏水1000mL
琼脂15~20g
121℃灭菌20min
(PH7.6肉浸汤琼脂90mL
羊血清5mL
3%淀粉溶液10mL
普通肉汤100mL
葡萄糖0.2g
PH值7.5~7.7
用法:将肉汤液琼脂121℃高压灭菌15分钟,冷至50℃时,以无菌操作加入灭菌的淀粉溶液及无菌羊血清混合后,倾注灭菌平板备用。)
明胶培养基(蛋白胨和牛肉膏提供氮源、维生素、矿物质;某些含明胶的细菌水解明胶,使其液化而降低明胶的胶凝作用)
蛋白胨5g
牛肉膏3g
明胶120g
蒸馏水1000mL
制法:将上述成分混合,置流动蒸汽灭菌器内,加热溶解,校正PH至7.2~7.4,用绒布过滤。分装试管,121℃灭菌15min,备用)
用法:1.用接种针穿刺接种
2.将试管置于35~37℃培养24h。
3将接种物放于2~8℃约10~30min,待降温后取出观察,如仍呈溶解状时即为明胶液化试验阳性,如凝固不溶者为阴性。
尿素琼脂(蛋白胨提供氮源,满足细菌生长需要,氯化钠维持稳定的渗透压,葡萄糖
为可发酵糖,磷酸二氢钾作为缓冲剂,酚红是指示剂,琼脂为凝固剂。用于细菌脲酶检测)蛋白胨1g
氯化钠5g
葡萄糖1g
磷酸二氢钾2g
0.4%酚红溶液3mL(酚红0.012g)
琼脂20g
蒸馏水1000mL
20%尿素溶液100mL(尿素20g)
pH6.6~7.0
制法: 在蒸馏水或去离子水100mL中,加入上述所有成分(琼脂除外),混合均匀,过滤灭菌。将琼脂加入900mL蒸馏水或去离子水中,121℃灭菌15min,冷却至50℃,加入灭菌好的基本培养基,混匀后,分装于灭菌试管内,放成斜面备用.
试验方法:挑取琼脂培养物接种,在36±1℃培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红。
三糖铁琼脂(TSI)(适合于肠杆菌科的鉴定。)
原理:用于观察细菌对糖的利用和硫化氢(变黑)的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1,只能利用葡萄糖的细菌,葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄。而发酵乳糖的细菌(e.coli),则产生大量的酸,使整个培养基呈现黄。如培养基接种后产生黑沉淀,是因为某些细菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氢,硫化氢和培养基中的铁盐反应,生成黑的硫化亚铁沉淀。
蛋白胨20g
牛肉膏5g
乳糖10g
蔗糖10g
葡萄糖1g
氯化钠5g
硫酸亚铁铵〔Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O〕0.2g
硫代硫酸钠0.2g
琼脂12g
酚红0.025g
蒸馏水1000mL
pH7.4
制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121℃高压灭菌15min.放置高层斜面备用.。
触媒(又称过氧化氢酶,具有过氧化氢酶的细菌,能催化过氧化氢成为水和原子态氧,继而形成氧气分子,出现气泡。用于链球菌即革兰氏阳性球菌初步分)
用法:(1)玻片法:取18~24h培养物,置于清洁玻片上,家一滴3%过氧化氢溶液,如产生大量气泡为阳性。
(2)试管法:取琼脂斜面(不含血液的)18~24h培养物,接种于试管内,加入3%过氧化氢溶液1mL,如产生大量气泡为阳性。
注意事项:①3%过氧化氢溶液要新鲜配制。
②不宜用血琼脂平板上生长的菌落,因红细胞含有触媒,可致假阳性反应。
③取对数生长期的细菌。
Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)
蛋白胨2g
氯化钠5g
磷酸氢二钾0.3g
琼脂4g
葡萄糖10g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL
蒸馏水1000mL
pH7.2
制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用.
试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36±1℃培养.
蛋白胨水(靛基质试验用)
蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化钠5g
蒸馏水1000mL
pH7.4
制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min.
靛基质试剂
柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL.
欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL.
试验方法:挑取小量培养物接种,在36±1℃培养1~2d,必要时可培养4~5d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红;或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培
养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红.
注:蛋白胨中应含有丰富的氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用. β—半乳糖苷酶试验(ONPG)(用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定)原理:有β—半乳糖苷酶的细菌,可以分解邻硝基酚β—半乳糖苷(ONPG),而释放黄的邻硝基酚。
方法:取新鲜细菌一环,加入到0.25mL的无菌生理盐水中,加甲苯一滴充分振动,37℃,5min,再加入无ONPG溶液0.25mL置于37℃水浴,悬液变黄则为阳性。
七叶苷水解试验(主要用于D链球菌与其他链球菌的鉴别)
原理:七叶苷可以被细菌分解为葡萄糖和七叶素,七叶素与培养基中的二价铁反应,形成黑化合物,使培养基变黑。
方法:将待检测菌接种于七叶苷培养基上,培养后观察结果。
鼠李糖培养基
蛋白胨  2.7g
氯化钠  5.0g
磷酸氢二钾0.3g
1%溴麝香草酚蓝水溶液  3.0mL
琼脂  5.0g
在我眼前却又消失不见是什么歌蒸馏水1000mL
制法:(1)除指示剂外将上述成分混于蒸馏水,并加热融化琼脂。调PH7.0后,加入指示剂,做成基础培养基。
(2)按0.5~1%量称取不同的糖(醇),每种分别加入15mL蒸馏水,调PH至7.0
(3)根据制作培养基的量,加如上述基础培养基,最后分装小试管,20分钟灭菌,置斜面。
注意事项:苦杏仁甙按0.2~0.3%量加入。阿拉伯糖需间歇三次灭菌,或过滤除菌。
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关于年龄
1.一个横贯终生的品德基本上都是在青年时代形成的,可惜在那个至关重要的时代,青年人受到的正面的鼓动永远是为成功而搏斗,而一般所谓的成功总是带有排他性、自私性的印记。结果,脸颊上还没有皱纹的他们,却在品德上挖下了一个个看不见的黑洞。
2.我不赞成太多地歌颂青年,而坚持认为那是一个充满陷阱的年代。陷阱一生都会遇到,但青年时代的陷阱最多、最大、最险。
3.历史上也有一些深刻的哲人,以歌颂青年来弘扬社会的生命力。但这里显然横亘着一种二律背反:越是坚固的对象越需要鼓动青年去对付,但他们恰恰因为年轻,无法与真正的坚持相斡旋。
4.青年时代的正常状态是什么,我想一切还是从真诚的谦虚开始。青年人应该懂得,在我们出生之前,这个世界已经精精彩彩、复复杂杂地存在过无数年,我们什么也不懂,能够站正脚下的一角建设一点什么,已是万幸。
5.中年是对青年的延伸,又是对青年的告别。这种告别不仅仅是一系列观念的变异,而是一个终于自立的成熟者对于能够随心所欲处置各种问题的自信。
6.中年人的当家体验是最后一次精神断奶。你突然感觉到终于摆脱了父母、兄长、老师的某种依赖,而这种依赖在青年时代总是依稀犹在的;对于领导和组织,似乎更贴近了,却又显示出自己的独立存在,
你成了社会结构网络中不可缺少的一个点;因此你在热闹中品尝了有生以来真正的孤立无援,空前的脆弱和空前的强大集于一身。
7.中年人一旦有了当家体验,就会明白教科书式的人生教条十分可笑。当家管着这么一个大摊子,每个角落每时每刻都在涌现着新问题,除了敏锐而又细致地体察实际情况,实事求是地解开每一个症结,简直没有高谈阔论、把玩概念的余地。这时人生变得很空灵,除了隐隐然几条人生大原则,再也记不得更多的条令。
8.中年人的坚守,已从观点上升到人格,而人格难以言表,他们变得似乎已经没有顶在脑门上的观点。他们知道,只要坚守着自身的人格原则,很多看似对立的观点都可相容相依,

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